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0 visualizzazioni • 3:12 min • April 30th, 2023
- May-Grunwald Giemsa, o colorazione MGG, è una procedura in due fasi per la colorazione differenziale delle cellule del midollo osseo, o BMC. Per iniziare la colorazione, ottenere uno striscio monostrato concentrato di BMC su un vetrino. Lasciare asciugare lo striscio all'aria. Trattare prima le cellule con colorante di May-Grunwald contenente eosina e blu di metilene disciolti in metanolo.
Il metanolo solvente fissa inizialmente le cellule. Il blu di metilene, un colorante basico con una carica positiva netta, colora i componenti cellulari acidi come gli acidi nucleici. L'eosina, un colorante acido con una carica netta negativa, colora i componenti cellulari di base come le proteine cationiche citoplasmatiche. Trattare le cellule con una soluzione tampone a pH 6,8 per consentire al colorante di precipitare e legarsi bene con i materiali cellulari.
Inoltre, trattare le cellule con la colorazione Giemsa, contenente anche coloranti acidi e basici, per migliorare l'effetto di colorazione complessivo. I coloranti basici, azzurro e blu di metilene, intensificano la colorazione dei componenti acidi mentre il colorante acido, eosina, aumenta la colorazione dei componenti basici.
Al microscopio, gli eritrociti appaiono bruno-rosati e le piastrine come piccoli punti viola. I granulociti mostrano un nucleo multilobato viola-blu e un citoplasma granulato rosso. Gli agranulociti appaiono di colore blu chiaro con un grande nucleo viola-rosa. Nel seguente protocollo, mostriamo la colorazione MGG delle cellule del midollo osseo.
- Per preparare le cellule del midollo osseo per la colorazione, posizionare prima i vetrini in camere monouso con schede filtranti premontate e posizionare le camere in una citocentrifuga. Aggiungere 100 microlitri di tampone FACS in ciascuna camera della scheda filtrante e centrifugare brevemente i vetrini. Al termine della centrifuga, aggiungere 100 microlitri di cellule in ciascuna camera e centrifugare le cellule.
Quindi, rimuovere con cautela i vetrini dalle camere per l'asciugatura all'aria. Per colorare le cellule del midollo osseo, immergere i vetrini in un barattolo di Coplin contenente la soluzione di May-Grunwald per 5 minuti. Successivamente, trasferire i vetrini in un barattolo di soluzione tampone con un pH di 6,8 per 1 minuto. Quindi trasferire i vetrini nella soluzione Giemsa R per 10 minuti, seguiti da un lavaggio di 10 secondi con acqua a pH neutro.
Dopo il lavaggio, lasciare asciugare i vetrini all'aria e applicare una goccia di terreno di montaggio su ciascun campione. Quindi, posizionare un bordo di un vetro di copertura sul vetrino e abbassare con cautela il vetro di copertura sulle celle, premendo delicatamente per rimuovere eventuali bolle d'aria.