Preparazione di frazioni subcellulari da cellule leucemiche: un metodo per generare frazioni cellulari e nucleari da cellule leucemiche

- Nelle cellule leucemiche, lo spostamento di macromolecole, come alcune proteine che sopprimono il tumore, tra il nucleo e il citoplasma, è deregolato. L'errata localizzazione di queste proteine le rende inattive, con conseguente crescita incontrollata delle cellule leucemiche. Possiamo determinare la posizione aberrante di tali proteine generando la frazione citoplasmatica e nucleare dalle cellule leucemiche.

Inizia prendendo il volume desiderato di cellule leucemiche in una provetta per microfuge e centrifuga per pellettare la cellula. Risospendere il pellet in un tampone di lisi ipotonica e quindi aggiungere la concentrazione di detergente desiderata. Il tampone di lisi ipotonica provoca il rigonfiamento delle cellule e la rottura della membrana plasmatica, lasciando intatta la membrana nucleare, isolando così le frazioni citoplasmatiche. Il detergente aiuta nell'estrazione delle proteine dagli organelli citoplasmatici.

Centrifugare le cellule lisate in sospensione e trasferire il surnatante in una nuova provetta. Il surnatante contiene la frazione citoplasmatica della cellula. Per preparare la frazione nucleare, risospendere il pellet rimanente nel tampone di lisi completo e a