Raccolta del midollo osseo dall'arto posteriore del topo

- Il midollo osseo è il tessuto gelatinoso spugnoso presente nel centro cavo delle ossa. Contiene cellule staminali ematopoietiche, che producono le cellule del sangue, un componente chiave del sistema immunitario. L'isolamento del midollo osseo dalle ossa più grandi, come il femore e la tibia, fornisce un'elevata resa cellulare.

Per raccogliere il midollo osseo, posizionare un topo soppresso in posizione supina e sterilizzare la pelle con etanolo. Tagliare la cavità addominale e rimuovere la pelle per esporre gli arti posteriori. Rompere la tibia, un osso lungo della gamba, e metterla in PBS freddo per mantenere le condizioni fisiologiche. Slogare la rotula e rimuovere i muscoli per esporre il femore, l'osso della coscia.

Tagliare il femore dalla parte inferiore dell'osso e metterlo in PBS freddo. Praticare un foro in una provetta per microcentrifuga di volume inferiore e posizionare entrambe le ossa con l'estremità aperta delle ossa rivolta verso il foro. Posizionare la provetta contenente le ossa in una provetta da microcentrifuga di volume maggiore e centrifugare le provette a doppio strato per pellettare il midollo osseo. Utilizzare il midollo osseo prelevato per ulteriori analisi. In questo protocollo, raccoglieremo il midollo osseo dagli arti posteriori di un topo.

- Per un prelievo di midollo osseo, posizionare un topo C57 black-6 di 6-10 settimane in posizione supina su un tampone chirurgico sterile e utilizzare etanolo al 70% per sterilizzare l'addome e gli arti posteriori. Usa un paio di forbici chirurgiche da dissezione per aprire la cavità addominale e rimuovere la pelle per esporre gli arti posteriori. Usando un paio di pinze per medicazione a punta smussata, tieni la tibia del topo proprio sotto la caviglia e usa un paio di pinze per medicazione curve per stabilizzare la tibia sotto la pinza per medicazione a punta smussata.

Usa la pinza per medicazione a punta smussata per rompere la tibia e rimuovere il muscolo per esporre l'osso, prima di posizionare la tibia in PBS freddo. Spostare la pinza di medicazione curva stabilizzatrice sul femore e far scorrere la pinza di medicazione a punta smussata sotto l'articolazione del ginocchio per tenere la rotula. Tirare delicatamente verso l'alto per dislocare la rotula e rimuovere il muscolo dalla rotula per esporre il femore. Tenere il femore esposto per la pinza per medicazione curva e utilizzare le forbici chirurgiche per tagliare il femore dalla parte inferiore dell'osso. Quindi, posiziona il femore in PBS.

Quindi, usa un ago calibro 18 per praticare un foro in una provetta da microcentrifuga da 0,5 millilitri e posiziona entrambe le ossa nella provetta con le estremità aperte delle ossa rivolte verso il basso nel foro. Posizionare la provetta da 0,5 millilitri in una provetta da microcentrifuga da 1,7 millilitri e centrifugare le provette a doppio strato in una microcentrifuga. Al termine della centrifugazione, verificare che il midollo osseo sia stato estratto sul fondo della provetta.