Arricchimento delle cellule T: una tecnica per isolare le cellule T da una popolazione di cellule miste mediante separazione magnetica

- Le cellule T, una classe di linfociti, svolgono un ruolo attivo nella lotta contro le infezioni. Insieme a molti altri tipi di cellule del sangue, le cellule T immunocompetenti sono presenti nella milza e nei linfonodi di topo. Per isolare selettivamente le cellule T, raccogliere la milza e i linfonodi murini e farli macerare su un colino cellulare. Lavare il tessuto con un mezzo appropriato per ottenere una sospensione a singola cellula.

Aggiungere cloruro di ammonio, potassio, o tampone ACK, per lisare i globuli rossi. Centrifuga per separare le cellule del sangue intatte dal lisato. Scartare il surnatante e risospendere le cellule in un tampone adatto. Trattare la sospensione con una miscela di anticorpi biotinilati anti-topo per colpire le cellule del sangue come granulociti, cellule B, cellule NK ed eventuali eritrociti rimanenti. Le cellule T non sono bersaglio e quindi rimangono non etichettate.

Quindi, aggiungi microsfere magnetiche anti-biotina alla sospensione. Tutte le cellule marcate con biotina si legano alle microsfere. Se tenute sotto l'influenza di un forte campo magnetico, le celle marcate magneticamente aderiscono alla parete del tubo. Le cellule T non marcate r