Smistamento cellulare attivato magneticamente: un metodo per isolare le cellule positive C-KIT

- c-Kit, o CD117, è un recettore transmembrana tirosin-chinasico espresso da cellule staminali ematopoietiche o progenitrici presenti nel midollo osseo e nel sangue. È anche un marcatore per rilevare la leucemia mieloide acuta.

Per isolare le cellule c-Kit positive, raccogliere le ossa murine delle zampe e schiacciarle per rilasciare il midollo dall'interno. Filtrare la sospensione midollare per rimuovere eventuali frammenti ossei. Stratificare il filtrato contenente cellule del midollo osseo su un mezzo a gradiente di densità e centrifugare per separare le cellule mononucleate dalle altre frazioni.

Raccogliere lo strato torbido di cellule mononucleate in una provetta contenente microsfere coniugate ad anticorpi di topo anti-CD117. Incubare per i complessi anticorpo-perlina per legarsi ai recettori CD117 sulle cellule c-Kit positive. Far passare la sospensione incubata attraverso una colonna magnetica posta in un campo magnetico. Tutte le celle positive c-Kit marcate con le microsfere magnetiche rimangono nella colonna, mentre le celle non marcate vi passano attraverso.

Rimuovere la colonna dal campo magnetico e lavare il contenuto utilizzando un tampone adatto per eluire le celle