Saggio CFU a base di metilcellulosa: un metodo per determinare l'effetto dei composti antitumorali sulla formazione di colonie nelle cellule leucemiche

- A volte, una cellula staminale o progenitrice subisce mutazioni, dando origine a una cellula staminale leucemica. In queste cellule, alcune proteine sono sovraregolate e l'uso di composti antitumorali contro tali proteine può aiutare a controllare la crescita delle cellule. L'effetto di questi composti antitumorali può essere analizzato utilizzando il saggio CFU monitorando il numero e le dimensioni delle colonie formate.

Inizia prelevando cellule progenitrici da un topo leuceme e diluendole in un terreno di coltura adatto. Aggiungere questa sospensione cellulare insieme al composto antitumorale appropriato alla metilcellulosa contenente citochine specifiche per topi e versarla in una capsula di Petri. Incubare questa miscela fino a quando non compaiono le colonie. La metilcellulosa è una matrice semisolida chimicamente inerte che impedisce la migrazione cellulare, mentre le citochine stimolano le cellule progenitrici a differenziarsi e formare colonie contenenti progenie riconoscibili.

Successivamente, colorare le colonie usando il cloruro di iodonitrotetrazolio, o INT, e incubare per una notte fino a quando le colonie diventano marrone rossastro scuro. Gli enzimi mitocondriali