Metabolismo extracellulare delle purine: un test basato sull'HPLC per misurare la generazione e il metabolismo dell'adenosina nelle cellule leucemiche

- L'adenosina, un nucleoside purinico presente in concentrazioni nominali nello spazio extracellulare, aiuta a controllare la proliferazione cellulare in condizioni fisiologiche. Durante condizioni patologiche come la leucemia, la concentrazione extracellulare di adenosina aumenta e inibisce le risposte immunitarie contro le cellule tumorali. L'accumulo di adenosina deriva dalla defosforilazione del nucleotide ATP o ADP o dalla degradazione alterata dell'adenosina a nucleosidi dell'inosina.

Per misurare la generazione e il consumo di adenosina, coltivare cellule tumorali in presenza di un substrato nucleotidico. L'attività metabolica dell'adenosina delle cellule determina le concentrazioni di varie molecole di purina presenti all'interno della coltura. Centrifugare per rimuovere le cellule e ottenere molecole di purina nel surnatante.

Per separare e quantificare le purine, trasferire il campione in fiale appropriate. Caricarli in una fase inversa, cromatografia liquida ad alte prestazioni o colonna RP-HPLC, contenente una fase stazionaria immobilizzata con ligandi idrofobici. Mentre passano attraverso la colonna, le molecole idrofobiche si adsorbono ai ligandi e vengono trattenute