JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Ricerca sul cancro
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- Gli organoidi sono minuscole colture cellulari tridimensionali derivate da cellule staminali tessuto-specifiche. Sono genomicamente stabili ma geneticamente modificabili attraverso la trasfezione e quindi ideali per l'indagine genetica. Per la trasfezione, seminare gli organoidi in una piastra di coltura multipozzetto con un terreno di coltura specifico e incubare per la durata desiderata. Quindi, aggiungi una miscela di dissociazione alla piastra per aiutare la dissociazione delle cellule organoidi. Trasferire il composto in una provetta e centrifugare. Risospendere il pellet dell'organoide in un tampone di elettroporazione contenente DNA plasmidico marcato in fluorescenza. Il tampone stabilizza le cellule e previene la morte cellulare dovuta allo stress elettrico.
Trasferire la miscela in una cuvetta ed elettroporare le cellule. Gli impulsi elettrici attraverso la membrana cellulare provocano la formazione temporanea di pori per facilitare l'assorbimento del DNA plasmidico nella cellula. Dopo l'elettroporazione, aggiungere immediatamente il terreno di coltura alla sospensione cellulare e trasferire la miscela in una provetta. Ora, centrifugare le cellule. Risospendere il pellet
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