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Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 3:21 min. • April 30th, 2023
- La porzione esocrina del pancreas costituisce le cellule acinose e le cellule duttali. Le cellule acinose sintetizzano e secernono enzimi digestivi nel loro lume. Le cellule duttali rivestono il tubo che fornisce questi enzimi all'intestino tenue. Per adattarsi allo stress genetico e ambientale, le cellule acinose subiscono una conversione morfologica e funzionale in cellule simili a dotti, chiamate metaplasia acinar-duttale o ADM.
A volte, l'ADM può portare all'insorgenza del cancro al pancreas. Per indurre l'ADM ex vivo, preparare una sospensione cellulare di collagene raffreddata combinando le cellule acinose primarie con il gel di collagene tenuto su ghiaccio per prevenire la solidificazione della matrice. Trattare la sospensione con un test ADM stimolante o inibitore di interesse.
Distribuire la sospensione in una piastra di coltura e incubare per facilitare la solidificazione del collagene e incorporare le cellule all'interno. Quindi, pipettare un volume aggiuntivo di terreno contenente lo stimolante o l'inibitore ADM del test di interesse sullo strato cellulare di collagene solidificato.
Incubare la piastra per una durata adeguata. Con l'induzione della metaplasia da acero a duttale, le cellule acinose primarie di forma piramidale si transdifferenziano per formare cellule con morfologia simile a quella delle cellule del condotto. Nel seguente protocollo, dimostreremo l'induzione ex vivo di metaplasia acinar-duttale in cellule acinose murine primarie utilizzando TGF alfa come stimolante.
- Per fare un gel di collagene, combina 7 millilitri di collagene di coda di ratto di tipo 1, 700 microlitri di 10 volte il terreno di Waymouth e 466,6 microlitri di idrossido di sodio molare da 0,34 molari in un tubo da 50 millilitri sul ghiaccio per fare il gel di collagene. In una provetta da 50 millilitri, unire volumi uguali di sospensione cellulare e gel di collagene dopo tre ore di incubazione e mescolare delicatamente. Piastra 2.000 microlitri un pozzetto alla volta in una piastra a sei pozzetti mantenendo la piastra sul ghiaccio e agita per distribuire uniformemente lo strato cellulare di collagene.
Per solidificare il terreno, incubare la piastra in un incubatore per colture cellulari a 37 gradi Celsius e al 5% di anidride carbonica per 30 minuti. Quindi aggiungere 1,5 millilitri per pozzetto di 1 volta il terreno completo di Waymouth con lo stimolo o gli inibitori desiderati.
Cambia il mezzo il giorno successivo e poi a giorni alterni. A seconda dello stimolo utilizzato, la metaplasia acinar-duttale, o ADM, può essere osservata tra il terzo e il quinto giorno.