Colorazione immunofluorescente di sferoidi: una tecnica per analizzare gli sferoidi per l'espressione dell'espressione intra ed extracellulare dell'antigene

- Gli sferoidi sono modelli tridimensionali in vitro di coltura cellulare. Per la colorazione con immunofluorescenza, in primo luogo, generare una coltura sferoidale del tipo di cellula richiesto in una piastra multipozzetto. Utilizzando una micropipetta con punta a orifizio largo, raccogliere gli sferoidi, facendo attenzione ad evitare rotture dovute a forze di taglio.

Successivamente, fissare e permeabilizzare gli sferoidi per rendere permeabili le singole cellule. Ora, incubare con una soluzione contenente proteine per bloccare i siti di interazione proteica non specifici sulla superficie cellulare. Trattare gli sferoidi con un cocktail di anticorpi primari desiderato. Incubare per far sì che gli anticorpi si leghino alle molecole bersaglio sulla superficie cellulare.

Successivamente, etichettare gli sferoidi con una soluzione di anticorpi secondari marcata in fluorescenza specifica per gli anticorpi primari. Infine, trattare gli sferoidi con un colorante fluorescente adatto che lega il DNA per colorare i nuclei delle cellule. Utilizzando un microscopio a fluorescenza a scansione laser, è possibile visualizzare più sezioni ottiche dello sferoide su diversi piani ottici.

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