Elettroporazione irreversibile: una tecnica per l'ablazione del tumore pancreatico nel topo

- L'elettroporazione irreversibile o IRE è una tecnica per l'ablazione dei tumori pancreatici somministrando brevi impulsi ad alta tensione di corrente elettrica al tumore, causando danni permanenti alle cellule tumorali. L'IRE ha un'elevata selettività e accessibilità per l'area tumorale target. Non provoca danni indotti dal calore alle cellule sane vicine, il che lo rende una promettente terapia antitumorale.

Inizia posizionando un topo anestetizzato sul lato e seziona la sua cavità addominale per localizzare il tumore sulla superficie del pancreas. Successivamente, utilizzare gli elettrodi, il bracketing del sito tumorale e somministrare impulsi mirati di corrente elettrica per la durata desiderata. La corrente elettrica oltre una certa soglia, provoca pori permanenti nella membrana cellulare delle cellule tumorali, impedendo alla cellula di tornare allo stato di omeostasi.

Questi pori causano l'uscita del contenuto intracellulare della cellula, portando quindi alla graduale morte cellulare per apoptosi. Ora, chiudi la cavità addominale e lascia che il topo si riprenda nella gabbia di casa. Infine, monitorare il pancreas per la riduzione delle dimensioni del tumore, post-elettroporazione. Nel seguente protocollo, dimostreremo un metodo per eseguire l'elettroporazione irreversibile per interrompere i tumori pancreatici dei topi.

- Prima che il tumore raggiunga i 6 millimetri di diametro, posizionare l'animale anestetizzato sul lato destro per consentire l'accesso al tumore e utilizzare un tagliaunghie e un tampone imbevuto di alcol per pulire il sito del tumore. Usando una pinza, sollevare la pelle direttamente sotto il tumore e inserire due elettrodi ad ago attraverso la pelle, paralleli al corpo per staffare il tumore, facendo attenzione che gli elettrodi non penetrino nella cavità peritoneale.

Impostare l'elettroporatore in modo che fornisca impulsi di 100 microsecondi, a una frequenza di 1 Hertz, a 1.500 volt per centimetro per un totale di 150 impulsi e utilizzare il pedale per erogare gli impulsi, separando ogni serie di 10 impulsi di 10 secondi per consentire la dissipazione del calore tra ogni serie di impulsi.

- Poiché le contrazioni muscolari si verificano durante l'erogazione dell'IRE e sono più pronunciate durante la serie iniziale di impulsi, assicurarsi che gli elettrodi siano ancora nella posizione desiderata e che l'animale sia ancora sedato dopo ogni serie di impulsi.

- Dopo non più di 200 secondi di dosaggio, rimuovere gli elettrodi e registrare la tensione effettiva erogata come visualizzato sull'elettroporatore. Quindi, rimetti il topo nella sua gabbia. Per l'IRE di un tumore ortotopico, da 8 a 10 giorni dopo l'impianto del tumore, utilizzare una pinza a muso smussato per esternalizzare il tumore con la pinza e catturare saldamente il tumore con gli elettrodi di platino della pinzetta.

Erogare gli impulsi di elettroporazione come appena dimostrato, mantenendo il tumore esternalizzato per l'ultima serie di impulsi per almeno 60 secondi per monitorare eventuali segni di emorragia. Quindi, riportare il tumore nella cavità addominale e chiudere l'incisione come dimostrato, monitorando l'animale fino a quando non si è completamente ripreso.