Generazione di un modello murino PDOX del cancro del colon-retto: studio della progressione del cancro del colon-retto in un modello murino

- I linfonodi, o LN, forniscono un microambiente per la crescita tumorale a causa delle cellule stromali presenti nei LN. Le cellule dendritiche follicolari, o FDC, sono i tipi più abbondanti di cellule stromali che rilasciano chemochine, citochine e fattori di crescita, che interagiscono con le cellule staminali del cancro del colon-retto e aumentano la crescita del tumore.

Gli FDC promuovono anche le metastasi extranodali del cancro del colon-retto a organi come i polmoni e il fegato. Per studiare la progressione del cancro del colon-retto, impiantamo cellule tumorali derivate dal tumore del paziente nell'organo, che corrisponde all'istotipo tumorale in un modello murino immunocompromesso noto come xenotrapianto ortotopico derivato dal paziente, o PDOX.

Inizia fissando un topo anestetizzato in posizione supina su una tavola di dissezione usando del nastro da laboratorio. Ora, mescola una quantità richiesta di cellule tumorali del colon-retto marcate con luciferasi e FDC in una provetta. Assumere la sospensione risultante in una siringa. Quindi, individua l'apertura anale del topo e inietta la miscela preparata per il cancro del colon-retto nello strato sottomucoso del retto.

Per osservare il carico metastatico, iniettare luciferina per via intraperitoneale ogni settimana e visualizzare il topo utilizzando l'imaging bioluminescente. In presenza dell'enzima luciferasi e dell'ATP, la luciferina nelle cellule tumorali si converte in ossiluciferina, emettendo luce blu-verde. Nel seguente protocollo, genereremo un modello murino ortotopico di xenotrapianto per studiare la progressione del cancro del colon-retto.

- Per creare un modello murino di CRC, posizionare un topo maschio NOD SCID di sei-otto settimane anestetizzato in posizione supina sotto un microscopio da dissezione, fissando il muso a un cono nasale di isoflurano e gli arti anteriori con del nastro adesivo per stabilità. Posiziona un piccolo oggetto, come una piccola sezione di garza, sotto la base della coda, sollevando l'ano per migliorare la visibilità e l'angolazione. Usa una pinza curva, lubrificata e con punta smussata per dilatare il canale anale ed esporre la mucosa anale e rettale distale e rimuovere le feci.

Collegare un ago rimovibile sterile calibro 30 a una siringa di vetro da 50 microlitri. Aspirare nella siringa 10 microlitri di sospensione tumorale e di cellule HK preparata nei passaggi precedenti. Iniettare i 10 microlitri nella sottomucosa rettale posteriore distale, da 1 a 2 millimetri sopra il canale anale, facendo attenzione a non passare nella cavità pelvica. Infine, rimuovere il topo dal cono del naso dell'isoflurano e osservarlo per un'ora dopo la procedura per segni di sofferenza.