Saggio di organizzazione del citoscheletro e dell'adesione focale: un metodo basato sull'immunofluorescenza per studiare l'adesione cellulare e la diffusione su substrati

- La morfologia del substrato influenza notevolmente il comportamento delle cellule tumorali e le risposte metastatiche. Una rete dinamica di citoscheletro di actina fornisce supporto strutturale alle cellule e media il movimento cellulare. Grandi complessi proteici associati alla membrana chiamati aderenze focali collegano il citoscheletro con la matrice extracellulare, facilitando la diffusione cellulare.

Per iniziare la colorazione, prendi una coltura di cellule tumorali e trattale con paraformaldeide per fissare e permeabilizzare le cellule. Ora, incubare le cellule con un reagente potenziatore del segnale contenente proteine per preparare le cellule a ridurre la colorazione di fondo. Aggiungere anticorpi primari anti-vinculina che si legano alla vinculina, una delle proteine all'interno del complesso di adesione focale.

Successivamente, incubare il campione con un anticorpo secondario coniugato con colorante fluorescente mirato all'anticorpo primario. Infine, trattare le cellule con coniugati falloidinici marcati in fluorescenza che si legano selettivamente ai filamenti di actina del citoscheletro. Osservare le cellule sotto un microscopio a scansione laser confocale per studi