Preparazione del blocco di tessuto cutaneo congelato: un protocollo per conservare campioni di melanoma cutaneo dalla pelle dorsale murina

- Le cellule staminali dei melanociti quiescenti, in risposta alle radiazioni UV o alla depilazione dei capelli, si attivano. Le cellule staminali attivate del melanoma possono portare al melanoma cutaneo, una forma di cancro della pelle. Per studiare il melanoma, prepariamo blocchi di tessuto cutaneo congelato per mantenere le strutture native del DNA e delle proteine durante la procedura di fissaggio.

Inizia posizionando un topo melanoma soppresso su un lettino chirurgico e rimuovi i peli dalla regione dorsale della pelle sopra la coda. Asportare la pelle e coprirla con una carta da filtro. Successivamente, immergere la carta da filtro contenente tessuto cutaneo in formalina tamponata neutra per il tempo desiderato. La formalina penetra nel tessuto cutaneo e si lega agli aminoacidi, provocando la reticolazione delle proteine, portando quindi alla fissazione dei tessuti.

Rimuovere il fazzoletto cutaneo dalla carta e tagliare il fazzoletto per ottenere pezzi della dimensione desiderata. Ora, incorporare i pezzi di tessuto verticalmente in un criomold riempito con terreno OCT e posizionare i criostampi su ghiaccio secco. L'OCT è una matrice di campioni che si solidifica al congelame