Preparazione del virion del poliomavirus a cellule di Merkel ricombinante (MCPyV): una tecnica per produrre virion MCPyV ricombinante ad alto titolo

- Il poliomavirus a cellule di Merkel, o MCPyV, è un oncovirus a DNA a doppio filamento con un genoma circolare che causa il carcinoma a cellule di Merkel, un tipo di cancro della pelle. Per preparare i virioni MCPyV, in primo luogo, trattare una coltura aderente di cellule di imballaggio con un cocktail contenente un agente di trasfezione, il genoma virale e due plasmidi di espressione che codificano le proteine necessarie per promuovere la replicazione virale.

Durante l'incubazione, il reagente di trasfezione forma lipoplex con i plasmidi, facilitando la loro consegna nelle cellule di confezionamento. Una volta all'interno del nucleo, il macchinario cellulare permette l'espressione dei genomi virali e plasmidici. I plasmidi di espressione codificano per l'antigene dei grandi tumori e per le proteine dell'antigene dei piccoli tumori. Queste proteine traslocano nel nucleo e guidano la replicazione del DNA virale. Successivamente, il genoma virale codifica per le proteine strutturali del capside. Queste proteine si spostano nel nucleo e aiutano nell'assemblaggio dei virioni ricombinanti.

Quindi, raccogli le cellule in coltura. Trattarli con una soluzione contenente detersivo e DNasi