Colorazione anticorpale dei melanociti a squame: una tecnica per rilevare i fattori di trascrizione espressi nei melanociti associati alla squama dorsale di modelli di zebrafish

- I fattori di trascrizione sono proteine contenenti domini leganti il DNA. Si legano a specifiche sequenze di DNA e aiutano a regolare l'espressione genica nelle cellule. Per rilevare l'espressione del fattore di trascrizione nei melanociti associati alla squama, in primo luogo, raccogliere squame dorsali pigmentate scure da un pesce zebra anestetizzato. Fissare le squame e trattarle con una soluzione di permeabilizzazione per rendere permeabili i singoli melanociti.

Trattare con una soluzione di candeggina per rimuovere i granuli di pigmento di melanina scura dalle cellule. Questo processo di sbiancamento elimina la possibilità di segnali di fondo associati al pigmento durante le successive fasi di colorazione. Incubare con una soluzione bloccante contenente proteine per bloccare i siti di legame proteico non specifici sulla superficie cellulare.

Ora, trattare il campione con gli anticorpi primari desiderati. Questi anticorpi si legano ai loro fattori di trascrizione bersaglio all'interno delle cellule. Quindi, etichettare il campione con anticorpi secondari marcati con fluorescenza specifici per gli anticorpi primari. Inoltre, trattare il campione con un colorante legante il DNA