Name: Toxoplasma gondii parete formazione di cisti in attivo dal midollo osseo macrofagi e condizioni Bradyzoite (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-12T17:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Scopri come indurre e visualizzare la formazione della parete cistica in Toxoplasma gondii utilizzando macrofagi e fibroblasti. Questo metodo permette di studiare le risposte allo stress del parassita.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Questo lavoro è stato sostenuto dalla University of Wisconsin-Madison Herman I. Shapiro Distinguished Graduate Fellowship (CMT), premio NIH AI072817 (AMP) e dell&#39;American Heart Association Award 0840059N (LJK).

1. Preparazione dei fibroblasti prepuzio umano (HFF) rivestite coprioggetto <ol><li> Mettere un coprioggetti sterile di vetro rotonda sul fondo dei pozzetti di una 24-pozzetti di coltura tissutale. </li><li> Per raccogliere HFFS da un confluente 150 centimetri 2 fiasco, lavare il pallone due volte con PBS 1X e aggiungere 2,5 ml di 0,025% tripsina-EDTA. Incubare Pallone a 37 ° C per 5-10 minuti. </li><li> Toccando il lato del pallone contro il palmo della mano può aiutare a staccare le cellule dal pallone. Una volta che le cellule hanno liberato dal pallone, aggiungere 150 ml di HFF media (Dulbecco Modified Aquila Media [DMEM] con 10% FBS, 2 mM L-glutamina e 1% di penicillina-streptomicina) e utilizzare il mezzo per sciacquare il pallone e raccogliere le cellule. </li><li> Dispensare 1 ml di cellule per bene con i coprioggetti. </li><li> Consentono alle cellule di diventare confluenti a 37 ° C, 5% di CO 2. </li></ol> 2. Preparazione L929 mezzo condizionato (CM) per lo sviluppo BMC <ol><li> L929 è un fibrosarcoma murino linea di cellule aneuploidi che secerne il fattore stimolante colonie di macrofagi dopo lunghi periodi di confluenza. Questa secrezione permette al CM da L929 cellule da utilizzare per sviluppare il mouse cellule del midollo osseo in macrofagi in coltura cellulare 1. </li><li> Una volta L929 cellule sono confluenti, lasciarli incubare per altri 7-9 giorni fino a che non appaiono sferici e iniziare a sollevare fuori il pallone. Raccogliere il supernatante e pellet eventuali cellule staccato a 425 xg per 10 minuti. Questo è il surnatante CM. </li><li> Uno a 150 cm 2 fiasco di cellule L929 rendimenti 30 ml di CM, che genera 150 ml di medium BMC. BMC mezzo è composto da 10% FBS, 20% CM, 1% di penicillina-streptomicina e 1% di L-glutamina in DMEM. </li></ol> 3. Isolamento del midollo osseo e di colture cellulari di BMC <ol><li> Sacrificare uno C57BL / 6 del mouse asfissia da CO 2 e la superficie sterilizzare con il 70% di etanolo. </li><li> Esporre il peritoneo sollevando la cute addominale vicino alla gamba e il taglio con le forbici. Evitare la puntura della cavità peritoneale. Ridurre alla gamba per esporre la tibia ed il femore. Tagliare il tessuto muscolare dalle ossa delle gambe con le forbici. </li><li> Per rimuovere il femore, una volta tagliata sotto il ginocchio e una volta vicino al fianco. Mettere le ossa in un piatto batteriologico Petri contenenti freddo PBS 1X. Non utilizzare colture di tessuti trattati piastre di Petri per questi passi perché il BMC aderisce in modo permanente. Utilizzare un bisturi per raschiare il tessuto muscolare in più. Tagliare l'osso appena sopra il ginocchio per esporre il midollo. </li><li> Ripetere i punti da (b) e (c) per raccogliere midollo osseo da femore secondo. </li><li> Utilizzare una siringa 10cc riempito con PBS 1X freddo e da 25 gauge per rimuovere il midollo osseo in una provetta da 50 ml. L'osso deve apparire puro midollo bianco una volta è stato rimosso. </li><li> Passare il composto PBS / midollo attraverso un ago 22 gauge per rompere ogni aggregati midollo osseo. </li><li> Spin la miscela a 425 xg per 10 minuti, e rimuovere il surnatante. </li><li> Risospendere il pellet in 8 ml di terreno BMC. Aggiungere 1 ml di sospensione cellulare e 9 ml di medie BMC a 8 piatti batteriologico Petri. </li><li> Incubare a 37 ° C, 5% di CO 2. </li><li> Il giorno 5, aggiungere 10 ml di media BMC per ogni piatto. Al 7 ° giorno, le cellule saranno pienamente sviluppati. BMC possono essere diversi passaggi per 1-2 settimane dopo la maturazione. </li><li> Per dividere BMC, rimuovere il supporto e aggiungere 5 ml di PBS 1X freddo ad ogni piastra di Petri. Incubare a 4 ° C per 30 minuti, fino a quando le cellule cominciano a sollevare. Sciacquare la BMC via il piatto con una pipetta sterile per il trasferimento. </li><li> Piscina del BMC in un tubo da 50 ml conica e pellet a 425 xg per 10 minuti. </li><li> Risospendere il pellet in 10 ml di mezzo di BMC e contare su un emocitometro. Seme 2x105 BMC per bene in un 24-pozzetti con coprioggetto di vetro rotondo sul fondo. Lasciate che il BMC aderire durante la notte prima di infettare con T. gondii. BMC in eccesso può essere reseeded su piastre di Petri per un uso successivo. </li></ol> 4. Infettare le cellule con T. gondii <ol><li> Infettare 25 cm 2 fiasco di HFFS confluenti con 2x10 6 T. gondii e crescere fino a quando le cellule iniziano a lisare (circa 2-3 giorni). </li><li> Utilizzare un raschietto per rimuovere le cellule infette monostrato cellula ospite dal pallone di coltura tissutale quindi rilasciare i parassiti dalle cellule ospiti passando il monostrato sloggiato con una 27-gauge. </li><li> Utilizzare un emocitometro per determinare il numero di parassiti nel terreno. </li><li> Infettare 10 5 parassiti per bene con coprioggetto di monostrati HFF dal protocollo n. 1, o BMC dal protocollo 3. Lasciate che i parassiti invadono per 3 ore a 37 ° C, 5% di CO 2. </li></ol> 5. Avvio T. gondii sviluppo bradyzoite da stress ambientali <ol><li> Sviluppo Bradyzoite in HFFS con aumento del pH medio e CO 2 fame <ol class="lalpha"><li> Preparare di sviluppo a medio. Di sviluppo a medio contiene RPMI 1640 senza bicarbonato, 1% FBS, 1% di penicillina-streptomicina, e 42 HEPES mM. pH a 8,0 e filtrare sterilizzare. </li><li> Rimuovere DMEM da HFFS infetti, sciacquare con PBS 1X, e aggiungere 1 ml di sviluppo a medio. </li><li> Incubare per 3 giorni a 37 ° C con aria ambiente. </li></ol></li><li> Attivazione di BMC <ol class="lalpha"><li> Preparare medio per attivare BMC. Medio di attivazione è di media BMC integrato con 100U/ml IFN-γ e 100 ng / ml LPS. Sonicare LPS in un bagno d'acqua per 2 minuti prima dell'uso per interrompere aggregati. </li><li> Rimuovere BMC media da pozzi e sostituirlo con 1 ml di terreno di attivazione. </li><li> Incubare a 37 ° C, 5% di CO 2 per 3 giorni. </li></ol></li></ol> 6. Rilevamento immunofluorescenza <ol><li> Sciacquare infetti pozzi tre volte con PBS 1X. </li><li> Fissare il monostrato con 200ul del 3% di formaldeide per 20 minuti. </li><li> Rimuovere fissativo e risciacquare pozzetti con PBS 1X. </li><li> Aggiungere 200μl di 0,1 M glicina a pozzi e lasciate riposare per 5 minuti. </li><li> Rimuovere glicina e risciacquare pozzetti con PBS 1X. </li><li> Aggiungere 250 microlitri del 3% BSA/0.2% TritonX-100 in PBS 1X per permeabilize e bloccare il monostrato per 30 minuti. </li><li> Rimuovere soluzione di saturazione e risciacquare pozzetti con PBS 1X. </li><li> Aggiungere 50 ml di una diluizione 1:250 di rodamina Dolichos biflorus agglutinina nel 3% BSA/0.2% Triton X-100 in PBS 1X. </li><li> Piastra di copertura e posto su piattaforma agitatore a temperatura ambiente per 1 ora </li><li> Lavare i coprioggetti 3 volte con 0,2% Triton X-100 in PBS 1X per 5 minuti ciascuno su un agitatore piattaforma. </li><li> Coprioggetto montare utilizzando medium Vectashield montaggio contenente 4'6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI). </li><li> Macchiato T. gondii può essere visualizzato usando un microscopio a fluorescenza con un appropriato filtro per rodamina ad un ingrandimento di 100x. </li></ol> 7. Rappresentante risultati La figura 1 mostra DBA colorazione rappresentante della T. gondii in BMMs attivato e HFFS sotto stress pH. Sia le macchie DBA spettacolo intorno parassita contenente vacuoli, che indica la presenza di componenti di parete cistica. L'immagine mostra BMM attivato colorazione DBA che è coerente con la superficie del vacuolo. La sezione di T. gondii del pH sottolineato HFFS mostra la parete cistica senza strutture interne macchiato. <img src="/files/ftp_upload/2091/2091fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Colorazione di DBA sottolineato T. gondii. parassiti intracellulari in condizioni di stress, BMMs attivato o pH sottolineato HFFS, sono stati marcati con rodamina DBA coniugato (rosso). Contrasto interferenziale differenziale (DIC) mostra la sagoma della cisti e la barra di scala nera è uguale a 2 micron. Esperimenti su animali Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in conformità con le linee guida e dei regolamenti previsti dalla University of Wisconsin Cura degli animali e del Comitato Usa.

<ol><li>Tomida, M., Yamamoto-Yamaguchi, Y., Hozumi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+a+factor+inducing+differentiation+of+mouse+myeloid+leukemic+M1+cells+from+conditioned+medium+of+mouse+fibroblast+L929+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Purification of a factor inducing differentiation of mouse myeloid leukemic M1 cells from conditioned medium of mouse fibroblast L929 cells.</a> J Biol Chem. 259 (17), 10978-10980 (1984).</li>
<li>Matrajt, M., Donald, R. G., Singh, U., Roos, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+differentiation+mutants+in+the+protozoan+parasite+Toxoplasma+gondii%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of differentiation mutants in the protozoan parasite Toxoplasma gondii.</a> Mol Microbiol. 44, 735-747 (2002).</li>
<li>Singh, U., Brewer, J. L., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+tachyzoite+to+bradyzoite+differentiation+mutants+in+Toxoplasma+gondii+reveals+a+hierarchy+of+gene+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of tachyzoite to bradyzoite differentiation mutants in Toxoplasma gondii reveals a hierarchy of gene induction.</a> Mol Microbiol. 44, 721-733 (2002).</li>
<li>J, P., Knoll, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Toxoplasma+gondii+development+mutants+identifies+a+potential+proteophosphogylcan+that+enhances+cyst+wall+formation.+Molecular+and+Biochemical+Parasitology%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Isolation of Toxoplasma gondii development mutants identifies a potential proteophosphogylcan that enhances cyst wall formation. Molecular and Biochemical Parasitology.</a> 169 (2), 120-123 (2010).</li>
<li>Bohne, W., Heesemann, J., Gross, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Bradyzoite-Specific+Toxoplasma+gondii+Antigens+in+Gamma+Interferon-Treated+Mouse+Macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Induction of Bradyzoite-Specific Toxoplasma gondii Antigens in Gamma Interferon-Treated Mouse Macrophages.</a> Infection and Immunity. 61 (3), 1141-1145 (1993).</li>
<li>Ibrahim, H. M., Bannai, H., Xuan, X., Nishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxoplasma+gondii+Cyclophilin+18-Mediated+Production+of+Nitric+Oxide+Induces+Bradyzoite+Conversion+in+a+CCR5-Dependent+Manner%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Toxoplasma gondii Cyclophilin 18-Mediated Production of Nitric Oxide Induces Bradyzoite Conversion in a CCR5-Dependent Manner.</a> Infection and Immunity. 77 (9), 3686-3695 (2009).</li>
<li>Lyons, R. E., McLeod, R., Roberts, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxoplasma+gondii+tachyzoite-bradyzoite+interconversion%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Toxoplasma gondii tachyzoite-bradyzoite interconversion.</a> Trends in Parasitology. 18 (5), 198-201 (2002).</li>
<li>Berghaus, L. J., Moore, J. N., Hurley, D. J., Vandenplas, M. L., Fortes, B. P., Wolfert, M. A., Boons, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immune+responses+of+primary+murine+macrophage-lineage+cells+and+RAW+264.7+cells+to+ligands+of+Toll-like+receptors+2%2C+3%2C+and+4%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Immunol+Microbiol+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Innate immune responses of primary murine macrophage-lineage cells and RAW 264.7 cells to ligands of Toll-like receptors 2, 3, and 4.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. , (2009).</li>
<li>Mordue, D. G., Scott-Weathers, C. F., Tobin, C. M., Knoll, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+patatin-like+protein+protects+Toxoplasma+gondii+from+degradation+in+activated+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A patatin-like protein protects Toxoplasma gondii from degradation in activated macrophages.</a> Mol Microbiol. 63 (2), 482-496 (2007).</li>
<li>Bohne, W., Heesemann, J., Gross, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+replication+of+Toxoplasma+gondii+is+necessary+for+induction+of+bradyzoite-specific+antigens%3A+a+possible+role+for+nitric+oxide+in+triggering+stage+conversion%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Reduced replication of Toxoplasma gondii is necessary for induction of bradyzoite-specific antigens: a possible role for nitric oxide in triggering stage conversion.</a> Infection and Immunity. 62 (5), 1761-1777 (1994).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Mentre il meccanismo di sviluppo bradyzoite non è pienamente compreso, analisi di genetica molecolare di T. stadio di conversione gondii in colture di tessuti ha portato alla scoperta di geni che sono coinvolti nella formazione di cisti bradyzoite 2,3,4. Le analisi inoltre ha portato alla constatazione che alcuni marcatori bradyzoite sono espressi in altre condizioni di stress prolungato, tra cui la crescita in macrofagi attivati ​​5,6. I metodi sopra descrivono come far crescere ...

<table><tbody><tr><td>Albumina sierica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo Dulbecco&amp;rsquo;s Modified Eagle (DMEM)</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11960-051</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td>inattivare al calore</td></tr><tr><td>Rodamina &lt;em&gt;Dolichos biflorus&lt;/em&gt; agglutinina</td><td>Vector Laboratories</td><td>RL-1032</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeide (16%)</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>18814</td><td></td></tr><tr><td>Glicina</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP381-5</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP310-1</td><td></td></tr><tr><td>IFN&amp;#947;</td><td>PeproTech Inc</td><td>315-05</td><td>Conservare in aliquote monouso</td></tr><tr><td>L-glutammina (200 mM)</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>Lipopolisaccaride (LPS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4391-1MG</td><td>Conservare in aliquote monouso</td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetto per microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-80 12CIR-1</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo RPMI 1640 in polvere (con L-glutammina, senza bicarbonato)</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>31800-022</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25200</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo di montaggio VectaShield con DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr></tbody></table>

toxoplasma gondii parete formazione di cisti in attivo dal midollo osseo macrofagi e condizioni bradyzoite

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii è un parassita intracellulare obbligato che possono infettare ogni cellula nucleata di animali a sangue caldo. Durante l&#39;infezione, T. gondii diffonde come una forma veloce replicando chiamato tachizoite. Tachizoiti convertire in una lenta crescita forma incistata chiamato bradyzoite da un processo di segnalazione che non è ben caratterizzato. All&#39;interno di animali, cisti bradyzoite si trovano nel sistema nervoso centrale e del tessuto muscolare e rappresentano la fase cronica di infezione. Conversione in bradyzoites può essere simulato in coltura da CO 2 fame, utilizzando medio alta con un pH, o l&#39;aggiunta di interferone gamma (IFNγ). Bradyzoites sono caratterizzate dalla presenza di un muro di cisti, a cui la lectina Dolichos biflorus agglutinina (DBA) si lega. DBA fluorescente viene utilizzato per visualizzare le cisti di parassiti muro cresciuto in fibroblasti umani prepuzio (HFFS) che sono stati esposti a basse emissioni di CO 2 e medio alto pH. Allo stesso modo, i parassiti che risiedono nel midollo osseo murino di derivazione macrofagi (BMMs) visualizzare una parete cisti rilevabile dal DBA dopo la BMMs sono attivate con IFNγ e lipopolisaccaride (LPS). Questo protocollo verrà illustrato come indurre la conversione di T. gondii a bradyzoites utilizzando un mezzo di crescita elevati pH con 2 CO bassa e l&#39;attivazione di BMMs. Cellule ospiti saranno coltivati ​​su vetrini, infettati con tachizoiti e sia attivato con aggiunta di IFNγ e LPS (BMMs) o esposti a una media di crescita elevato pH (HFFS) per tre giorni. Al termine delle infezioni, cellule ospiti sarà fissato, permeabilizzate, e bloccato. Pareti cisti verrà visualizzato usando DBA rodamina con microscopia a fluorescenza.

Toxoplasma gondii converte in una forma cisti in risposta a stress ambientali, che può essere imitato in modelli di colture di tessuti. Questo video mostra le tecniche per esaminare la formazione di cisti muro attivando midollo osseo macrofagi o modificare il pH medio di crescita in cellule di fibroblasti.

Toxoplasma gondii parete formazione di cisti in attivo dal midollo osseo macrofagi e condizioni Bradyzoite

Toxoplasma gondii è un parassita intracellulare obbligato in grado di invadere qualsiasi cellula nucleata di animali a sangue caldo. Durante l'infezione, T. gondii ...

L'obiettivo generale di questa procedura è indurre e visualizzare la formazione della parete cistica in Toxoplasma gondii in vitro. Questo viene ottenuto coltivando prima macrofagi e fibroblasti.E poi infettando queste cellule ospiti, le risposte allo stress del parassita possono essere indotte nell'occhio mediante shock dei fibroblasti con pH o attivazione dei macrofagi, entrambi i quali portano alla formazione della parete cistica. Infine, viene aggiunta una lectina fluorescente alle colture, che si lega alla parete cistica, consentendo la visualizzazione dei cisti mediante microscopia a immunofluorescenza. Ciao, sono Crystal Tobin del laboratorio della dottoressa Laura Noel del Dipartimento di Microbiologia e Immunologia Medica dell'Università del Wisconsin di Madison.Sono Angela Pollard, anch'io del No Lab. Oggi vi mostreremo un procedimento per la formazione in vitro della parete cistica di Toxoplasma gondii. Utilizziamo questo procedimento nel nostro laboratorio per studiare le risposte del parassita a condizioni di stress.Iniziamo. Posizionare un'ansa sterile in vetro rotonda sul fondo di ogni pozzetto di una piastra per colture cellulari a 24 pozzetti per indurre la convers

toxoplasma-gondii-cyst-wall-formation-activated-bone-marrow-derived

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Questo studio descrive lo sviluppo di un metodo modificato CsCl che purifica facilmente T. gondii oocisti dalle feci di gatti infetti che sono adatti per biologia molecolare e la cultura manipolazione dei...

Ottenere altamente purificato Toxoplasma gondii Oocisti da un gradiente discontinuo di cloruro di cesio

Forward genetica è un metodo efficace per svelare il livello molecolare di...

Uno screening genetico per isolare Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

Questo video mostra un test per quantificare la crescita intracellulare dei parassiti nei macrofagi derivati dal midollo osseo (BMM). Le cellule macrofagiche sono infettate dagli stadi invasivi mobili e non mobili della Leishmania, rispettivamente i promastigoti metaciclici e gli amastigoti. I parassiti invadono i macrofagi, interiorizzandosi in un vacuolo parassitoforo e moltiplicandosi all'interno. La crescita intracellulare del parassita viene quantificata utilizzando un microscopio dopo...

Un test in vitro per quantificare la crescita intracellulare del parassita nei macrofagi

Qui riportiamo un metodo per l'utilizzo di tipo I e tipo...

La manipolazione genetica in<em&gt; Δku80</em&gt; Ceppi per analisi genomica funzionale di<em&gt; Toxoplasma gondii</em

I macrofagi sono da tempo riconosciuti come una componente critica delle risposte immunitarie innate e adattative. La recente esplosione di conoscenze relative agli aspetti evolutivi, genetici e biochimici dell'interazione tra macrofagi e microbi ha rinnovato l'attenzione scientifica ai macrofagi. Questo articolo descrive un metodo per differenziare macrofagi da midollo osseo di topo.

Derivate dal midollo osseo macrofagi Production

Usando questo protocollo, siamo stati in grado di immagine di 160 micron di spessore sezioni di cervello di topi infettati con il parassita Toxoplasma gondii, che consente la visualizzazione e l'analisi del rapporto spaziale tra il parassita encysting e il neurone infetto.

3-D imaging e analisi di neuroni infetti In Vivo Con Toxoplasma gondii

La genetica in avanti è un potente approccio per identificare i geni nei patogeni intracellulari importanti per la resistenza all'immunità autonoma cellulare. L'approccio attuale utilizza cellule immunitarie innate, in particolare macrofagi, per identificare nuovi geni Toxoplasma gondii importanti per l'evasione immunitaria.

Forward Genetica schermi usando macrofagi per identificare<em&gt; Toxoplasma gondii</em&gt; geni importanti per la Resistenza di IFN-γ-Dependent cellulare Immunità autonoma

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di istruire come estrarre, mantenere e dissociare le cellule di astrocite e microglia dal sistema nervoso centrale, seguite da infezione da parassiti protozoi.

Isolamento concomitante di astrociti primari e microglia per l'infezione da parassiti di Protozoi

Questo studio mostra un protocollo dettagliato per eseguire la microscopia ad espansione ultrastrutturale in tre fasi del ciclo di vita in vitro di Trypanosoma cruzi, il patogeno responsabile della malattia di Chagas. Includiamo la tecnica ottimizzata per le proteine del citoscheletro e la marcatura del pan-proteoma.

Microscopia ad espansione ultrastrutturale in tre fasi del ciclo di vita in vitro di Trypanosoma cruzi

Dimostriamo qui che riprogrammazione epigenetica tramite trasferimento nucleare di cellule somatiche (SCNT) può essere utilizzato come uno strumento per generare modelli di topo con pre-definito recettore delle cellule T (TCR) specificità. Questi topi transnuclear esprimono il corrispondente TCR dal loro luogo endogena sotto il controllo del promotore endogeno.

I topi con Transnuclear predefiniti Specificità cellule T contro il recettore Toxoplasma gondii Ottenuto Via SCNT

Scopri come indurre e visualizzare la formazione della parete cistica in Toxoplasma gondii utilizzando macrofagi e fibroblasti. Questo metodo permette di studiare le risposte allo stress del parassita.

Toxoplasma gondii parete formazione di cisti in attivo dal midollo osseo macrofagi e condizioni Bradyzoite

Esplora altri video