Name: Determinazione del numero delle cellule durante coltura cellulare utilizzando il contatore di cellule Scettro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-26T18:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: Impara a utilizzare il contatore di cellule Scettro per il conteggio cellulare automatizzato in coltura. Questo metodo portatile migliora accuratezza e riproducibilità rispetto all'emocitometria manuale tradizionale.

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1. L'importanza della conta cellulare <ol><li> Conteggio delle cellule è un passo necessario, ma noioso per la coltura cellulare in vitro. </li><li> Le concentrazioni di cellule coerente garantire la riproducibilità sperimentale e precisione. </li><li> Conta delle cellule sono importanti per monitorare la salute delle cellule e tasso di proliferazione, valutando immortalizzazione o trasformazione, per la successiva semina cellule esperimenti, trasfezione o infezione, e prepararsi per saggi cellulari. </li><li> Nonostante la necessità di velocità e la precisione nel conteggio delle cellule, il 71% di 400 ricercatori hanno esaminato le cellule contare utilizzando un emocitometro. Mentre hemocytometry è poco costoso, è laborioso e soggetto a bias di utenti e abuso, che si traduce nella conta inesatti. </li><li> Fonti di errore in hemocytometry includono: distribuzione disomogenea delle cellule nel campione, troppe o troppo poche cellule nel campione, le decisioni soggettive se una data cellula rientra nel settore di conteggio definita, la contaminazione del emocitometro, utente-utente variazione , e la variazione del tasso di riempimento emocitometro. </li><li> Per alleviare la noia associati a conteggio manuale, il 29% dei ricercatori contare le celle con dispositivi automatizzati conteggio delle cellule. Tuttavia, per la maggior parte dei ricercatori, il prezzo associati a questi grandi strumenti da banco è una barriera al loro utilizzo. </li><li> Il contatore di cellule Scettro è un dispositivo automatico portatile che offre l'automazione e la precisione del conteggio Coulter ad un costo relativamente basso. </li><li> Il sistema utilizza il principio Coulter di impedenza a base di rivelazione di particelle in un formato miniaturizzato utilizzando una combinazione di hardware analogico e digitale per il rilevamento, elaborazione del segnale, l'archiviazione dei dati e visualizzazione grafica. </li><li> Il sensore usa e getta è stato progettato con un microfabbricazione, cellula di rilevamento zona che permette la discriminazione in base alle dimensioni delle cellule e il volume delle cellule a livello sub-micron e sub-picolitri risoluzione. </li><li> Avanzata con precisione liquido di gestione dei canali e l'elettronica, il contatore di cellule Scettro visualizza graficamente le statistiche sulla popolazione cella come un istogramma. </li></ol> 2. Preparazione di una singola cellula Sospensione conteggio <ol><li> Per utilizzare il contatore di cellule Scettro, inizia diluendo un'unica sospensione di cellule, in soluzione salina tamponata con fosfato. Una concentrazione di 10,000-500,000 cellule per ml è ottimale. </li><li> Trasferire 100 ml di cellule diluito in una provetta da microcentrifuga 1,5 ml. </li></ol> 3. Esecuzione di conteggio delle cellule usando lo Scettro <ol><li> Accendere il contatore di cellule Scettro tenendo premuto la leva sul retro dello strumento ed attendere la istruzioni sullo schermo ad apparire. </li><li> Quando richiesto, collegare un sensore per la fine dell'unità Scettro con il pannello di elettrodi di rilevamento rivolto verso la parte anteriore dello strumento. </li><li> Sensori scettro composto da una camera di stampaggio di precisione di campionamento, con una zona di rilevamento elettronico e integrato delle cellule-sensing elettrodi. I sensori consentono di discriminare le dimensioni delle cellule a livello sub-micron di risoluzione, e il volume delle cellule a livello sub-picolitri risoluzione. </li><li> Ingegneria sensore coerente, assicura che i volumi di campione pari sono contati e la misurazione delle dimensioni accurate sono fatti. </li><li> Una volta che il sensore è collegato, eseguire ogni passaggio del processo di conteggio in base alla istruzioni sullo schermo come segue: </li><li> Quando lo schermo si legge "Tenere premuto lo stantuffo per iniziare," spingere il pistone. Lo schermo sarà quindi leggere "immergere il sensore." Immergere il sensore nella soluzione sospensione cellulare e rilasciare lo stantuffo per aspirare la sospensione cellulare nel sensore. </li><li> Il pistone agisce come un segnale elettrico e prelevare il campione di più volume morto nel sensore. La velocità o la precisione di immergersi non importa come fa con pipettaggio. Questo processo richiederà alcuni secondi. Quando è pronto, lo strumento emette un segnale acustico, e "Sample caricati" sarà visualizzato sullo schermo. </li><li> Una volta che il campione è caricato nel sensore lo ha emesso, attraverso la zona di rilevamento per valutare le dimensioni delle cellule e il volume delle cellule, poi attraverso il microcanali. Il 50 l di campione è contato il sensore dice lo strumento per fermare il conteggio. </li><li> Dopo il conteggio è completa, lo schermo dello strumento leggerà "Count completa. Rimuovere sensore e scartare". Seguire le operazioni, e rimuovere ed eliminare il sensore. </li><li> Lo strumento quindi visualizzare un istogramma della dimensione della cella o diametro sullo schermo così come la concentrazione di cellule per ml. </li></ol> 4. Analisi dei dati <ol><li> Dopo il conteggio è completa e l'istogramma viene visualizzato sullo strumento, si applicano cancelli premendo il pulsante di commutazione. Selezionare "gating auto" o "ultimo uso" per impostare in modo automatico la porta in base al profilo istogramma, o di utilizzare le porte dal conteggio precedente. </li><li> Indipendentemente dalla scelta, le porte possono essere spostati manualmente per mettere a punto i dati. Premere il pulsante di passare nuovamente per selezionare il cancello di sinistra e di far scorrere laggle per spostare il cancello come desiderato. </li><li> Quindi premere il passare nuovamente per attivare la porta a destra e scorrere la leva per posizionare il cancello giusto. Clicca di nuovo, una nuova concentrazione delle cellule, volume medio delle cellule e diametro sarà visualizzato. </li><li> La ginocchiera può anche essere spostata su entrambi i lati per passare il display tra data, ora, dimensione media delle cellule, ed il volume medio delle cellule. </li><li> Fino a 72 istogrammi possono essere memorizzati sullo strumento stesso. Per caricare i dati ad un personal computer, collegare lo strumento tramite la porta cavo USB sul display. </li><li> Sul PC, fare doppio clic sul software applicativo Scettro per lanciare il software, quindi fare clic su "connect". Tutti i conteggi si porta automaticamente al software. </li><li> Il Software applicativo Scettro visualizza l'istogramma che ripartisce popolazione della cultura in volume o diametro. I file scaricati possono essere esportati in Microsoft Excel, dove i dati grezzi vengono visualizzati in contenitori di diametro cella specificata o volumi cellulari. </li></ol> 5. Rappresentante Risultati <ol><li> Diciannove diverse linee cellulari sono stati preparati per il conteggio e teorici delle concentrazioni di partenza sono stati determinati utilizzando un contatore Coulter. Queste sospensioni cellulari sono state poi ulteriormente diluito per ottenere sospensioni cellulari a concentrazioni cellulari teorica. </li><li> Il contatore di cellule Scettro è stato poi utilizzato per determinare le concentrazioni cellulari. La figura 1 mostra 5 diluizioni che sono stati misurati per 5 linee di cellule rappresentante insieme alla concentrazione cellulare teorica. </li><li> L'elevato grado di linearità come indicato dai valori di R2, dimostra che il conteggio Scettro è un metodo affidabile per le linee cellulari testate, attraverso una vasta gamma di funzionamento lineare. </li><li> L'accuratezza complessiva relativa di conteggio Scettro è dimostrato nella figura 2, in cui vengono confrontati i dati ottenuti dal conteggio Scettro con conteggi ottenuti da Counting Coulter. </li><li> Il registro di conta delle cellule Scettro è in funzione del log dei conteggi Coulter, e dimostra che, in tutte le linee cellulari testate, conta Scettro corrispondere conta Coulter. </li><li> Conta di 19 linee cellulari sono state effettuate utilizzando un Z2 Coulter Counter, il contatore di cellule Scettro, un contatore automatico visione basata, come Vi-Cell o sistema Innumerevoli, e un hemocytemeter. </li><li> Conteggi sono stati eseguiti secondo le istruzioni del produttore, utilizzando la stessa cellula di partenza sospensione e diluizioni identici. I risultati mostrati in Figura 3 dimostrano che le concentrazioni misurate dal cellulare Scettro contando strettamente corrispondere concentrazioni di cellule teorica con elevata linearità. </li><li> Il coefficiente di variazione percentuale, o CV, è stato calcolato per ogni diluizione di ciascuna linea cellulare per ogni sistema di conteggio. La Figura 4 mostra il CV% medio di oltre 19 linee di cellule rispetto alla concentrazione cellulare e metodo di conteggio. </li><li> All'interno della gamma di funzionamento, il contatore di cellule Scettro è più preciso conteggio emocitometro visione basata, mostrando piccole deviazioni standard e piccoli coefficienti medi di variazione. </li><li> Conteggio scettro è dieci volte più veloce hemocytometry e più velocemente di altri sportelli automatici troppo. Nella Figura 5, SF9, MCF7, e cellule HEK293 sono state contate utilizzando i metodi descritti in questo video. </li><li> Il tempo medio necessario per misurare la concentrazione cellulare è stato registrato. Si noti che hemocytometry è stata eseguita una sola volta per ogni campione. </li><li> Scettro effettua misurazioni in base alle dimensioni della cella. Così qualsiasi eventuale cambiamento morfologico cellulare possono essere catturati nell'istogramma. Culture sano visualizzare un bel distribuzione gaussiana a forma di campana, mentre le cellule malsane, lisare, e provocare un cambiamento nel istogramma a sinistra (Figura 6, pannello a sinistra). </li><li> Allo stesso modo, quando una popolazione pari al 50% cellule morte sono state mescolate con 50% di cellule vive, si sposta istogramma sono stati anche osservati (Figura 6, pannello di destra). </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig1.jpg" alt="Figura 1"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig2.jpg" alt="Figura 2"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig3.jpg" alt="Figura 3"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig4.jpg" alt="Figura 4"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig5.jpg" alt="Figura 5"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig6.jpg" alt="Figura 6"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig7.jpg" alt="Figura 7">

<ol><li>Barghshoon, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarghshoon%2C+S+%22Cell+Counting+Survey%22">Cell Counting Survey</a>. , Millipore. (2009).</li>
<li>Tucker, K. G., Chalder, S., al-Rubeai, M., Thomas, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+hybridoma+cell+number%2C+viability%2C+and+morphology+using+fully+automated+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Enzyme+Microb+Technol%22%5BJournal%5D)">Measurement of hybridoma cell number, viability, and morphology using fully automated image analysis.</a> Enzyme Microb Technol. 16 (1), 29-35 (1994).</li>
<li>Houwen, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHouwen%2C+B+%22Fifty+years+of+hematology+innovation%3A+the+Coulter+principle%22">Fifty years of hematology innovation: the Coulter principle</a>. , Medical Laboratory Observer. (2003).</li>
</ol>

Kathleen Ongena, Chandreyee Das, Janet L. Smith, Sonia Gil, e Grace Johnston sono dipendenti di Millipore, che produce gli strumenti utilizzati in questo articolo.

Confrontando le prestazioni del contatore di cellule Scettro ai risultati di altri metodi di conteggio, possiamo concludere che questo nuovo portatile, contaglobuli automatizzato offre conta delle cellule preciso, veloce e affidabile in un ampio campo di funzionamento. La funzionalità di conteggio Scettro è il risultato della tecnologia di precisione costruita incorporato nella punta del sensore e la strumentazione sofisticata conteggio basato sul principio Coulter. La qualità delle prestazioni suggerisce Scettro contare come metodo per aumentare la velocità e migliorare la riproducibilità dei saggi cellulari. Il formato palmare permette noia veloce destra libera conteggio al cofano colture cellulari.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del materiale </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commento </td></tr><tr><td> Scettro 2,0 contatore portatile cella automatizzata con sensori micron 40 Scettro </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20040 </td><td></td></tr><tr><td> Scettro 2,0 contatore portatile cella automatica con 60 sensori Scettro micron </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20060 </td><td></td></tr><tr><td> Sensori scettro, 60 micron </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC60050 </td><td> 50 Pack di sensori </td></tr><tr><td> Sensori scettro, 40 micron </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC40050 </td><td> 50 Pack di sensori </td></tr><tr><td> Universal Power Adapter </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCPOWER </td><td> </td></tr><tr><td> Scettro O-Ring Kit </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCOCLIP </td><td> 2 O-ring e un coperchio del filtro </td></tr></tbody></table>

determinazione del numero delle cellule durante coltura cellulare utilizzando il contatore di cellule scettro

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

Conteggio delle cellule è spesso un passo necessario, ma noioso per la coltura cellulare in vitro. Le concentrazioni di cellule coerente garantire la riproducibilità sperimentale e precisione. Conta delle cellule sono importanti per monitorare la salute delle cellule e tasso di proliferazione, valutando immortalizzazione o trasformazione, per la successiva semina cellule esperimenti, trasfezione o infezione, e prepararsi per saggi cellulari. E &#39;importante che conta delle cellule essere precisi, coerenti e rapidi, in particolare per le misure quantitative di risposte cellulari. Nonostante questa esigenza di velocità e la precisione nel conteggio delle cellule, il 71% di 400 ricercatori hanno esaminato 1 che contare le celle con un emocitometro. Mentre hemocytometry è poco costoso, è laborioso e soggetto a bias di utenti e abuso, che si traduce nella conta inesatti. Hemocytometers sono realizzati in speciale vetro ottico su cui sono caricati sospensioni cellulari in volumi specificati e contati al microscopio. Fonti di errori in hemocytometry includono: distribuzione disomogenea delle cellule nel campione, troppe o troppo poche cellule nel campione, le decisioni soggettive sul fatto che una data cellula rientra nel settore di conteggio definita, la contaminazione del emocitometro, utente-utente variazione , e la variazione del tasso di riempimento emocitometro 2. Per alleviare la noia associati a conteggio manuale, il 29% dei ricercatori contare le celle con il conteggio delle cellule automatizzate dispositivi, questi comprendono visione basati su contatori, sistemi che rilevano le cellule utilizzando il principio Coulter, o citometria a flusso 1. Per la maggior parte dei ricercatori, il principale ostacolo all&#39;utilizzo di un sistema automatizzato è il prezzo associato a queste grandi strumenti da banco 1. Il contatore di cellule Scettro è un dispositivo automatico portatile che offre l&#39;automazione e la precisione del conteggio Coulter ad un costo relativamente basso. Il sistema utilizza il principio Coulter di impedenza a base di rivelazione di particelle 3 in un formato miniaturizzato utilizzando una combinazione di hardware analogico e digitale per il rilevamento, elaborazione del segnale, la memorizzazione dei dati e visualizzazione grafica. La punta di usa e getta è stato progettato con un microfabbricazione, cellula di rilevamento zona che permette la discriminazione in base alle dimensioni delle cellule e il volume delle cellule a livello sub-micron e sub-picolitri risoluzione. Avanzata con precisione liquido di gestione dei canali e l&#39;elettronica, il contatore di cellule Scettro report statistici popolazione di cellule visualizzati graficamente come un istogramma.

Il contatore di cellule Scettro è un dispositivo portatile automatizzato che può essere usato per contare le celle, monitorare diametro delle cellule e il volume, e possono essere usate per controllare la salute e la qualità di popolazioni cellulari da una cultura all&#39;altra.

Determinazione del numero delle cellule durante coltura cellulare utilizzando il contatore di cellule Scettro

Il conteggio cellulare è spesso un passaggio necessario ma tedioso per la coltura cellulare in vitro. Concentrazioni cellulari costanti garantiscono la riproducibilità sperimentale e...

Il contatore di cellule Scepter è un dispositivo automatico portatile per il conteggio delle cellule, il monitoraggio del diametro e del volume cellulare e la valutazione della salute e qualità delle popolazioni cellulari. Offre significativi vantaggi rispetto ad altri metodi di conteggio, inclusi una maggiore accuratezza, facilità d'uso e un costo ridotto per il conteggio delle cellule. Utilizzando il Scepter, seguire le istruzioni visualizzate sul display grafico per aspirare le cellule nel sensore monouso.Le cellule vengono quindi contate e il dispositivo fornisce concentrazioni cellulari e statistiche, che possono essere caricate su un computer ed analizzate. Ciao, sono Sonya. Sono una ricercatrice qui a Millport e oggi vi mostrerò come utilizzare lo scepter.Contare le cellule è un passaggio necessario ma noioso per la coltura cellulare in vitro. Concentrazioni cellulari costanti garantiscono riproducibilità e accuratezza sperimentale. Il conteggio cellulare è importante per monitorare la vitalità e il tasso di proliferazione cellulare, valutare cellule immortali o trasformate da seminare per esperimenti successivi, trasfezione o infezione, e per la preparazione di saggi basati su cellule, nonostante la necessità di velocità e precisione.Nel conteggio cellulare, il 71% di 400 ricercatori intervistati conta le cellule utilizzando un emocitometro. Sebbene l'emocitometria sia economica, è un processo laborioso e soggetto a bias e uso improprio da parte dell'operatore, il che porta a conteggi inaccurati. Le fonti di errore nell'emocitometria includono una distribuzione non uniforme delle cellule nel campione, un numero eccessivo o insufficiente di cellule nel campione.Decisioni soggettive riguardo al fatto che una determinata cellula rientri nell'area definita per il conteggio. Contaminazione dell'emocitometro, variazioni tra utenti e variazioni nel tasso di riempimento dell'emocitometro per ridurre la monotonia associata al conteggio manuale. Il 29% dei ricercatori conta le cellule utilizzando dispositivi automatizzati per il conteggio cellulare.Tuttavia, per la maggior parte dei ricercatori, il prezzo associato a questi strumenti da banco di grandi dimensioni rappresenta un ostacolo al loro utilizzo. Il contatore cellulare Scepter è un dispositivo portatile automatizzato che offre l'automazione e la precisione del conteggio coulteriano a un costo relativamente basso e in un formato portatile di facile utilizzo. Il sistema impiega il principio Coulter di rilevamento delle particelle basato sull'impedenza in un formato miniaturizzato, utilizzando una combinazione di hardware analogico e digitale per l'elaborazione del segnale di rilevamento, la memorizzazione dei dati e la visualizzazione grafica.Il sensore monouso è progettato con una zona di rilevamento delle cellule microfabbricata che permette la discriminazione in base alla dimensione e al volume cellulare con risoluzione submicrometrica e sub-picolitro, migliorata da canali per la movimentazione precisa dei liquidi e da componenti elettronici. Il contatore cellulare Scepter visualizza graficamente le statistiche della popolazione cellulare sotto forma di istogramma da utilizzare. Il contatore cellulare Scepter inizia diluendo una sospensione monocellulare di cellule in soluzione salina tamponata al fosfato.Una concentrazione di 10.000 a 500.000 cellule per millilitro è ottimale. Trasferire 100 microlitri di cellule diluite in un tubo microview da 1,5 millilitri. Accendere il contatore cellulare Scepter premendo e tenendo premuto l'interruttore sul retro dello strumento e attendere l'apparizione delle istruzioni a schermo.Quando richiesto, collegare un sensore all'estremità dell'unità dello scettro con il pannello sensoriale dell'elettrodo rivolto verso la parte anteriore dello strumento. I sensori Scepter sono costituiti da una camera di campionamento modellata con precisione, dotata di una zona sensoriale elettronica e di elettrodi integrati per il rilevamento cellulare. Questi sensori permettono di discriminare la dimensione cellulare con risoluzione submicrometrica e il volume cellulare con risoluzione sub-picolitro.Un'ingegnerizzazione costante del sensore garantisce che vengano conteggiati volumi di campione uguali e che vengano effettuate misurazioni precise delle dimensioni. Una volta collegato il sensore, eseguire ogni passaggio del processo di conteggio seguendo le istruzioni visualizzate sullo schermo come segue. Quando sullo schermo compare la scritta, tenere premuto il pistone per iniziare a premere il pistone; lo schermo indicherà quindi "immergere il sensore", immergere il sensore nella soluzione di sospensione cellulare e rilasciare il pistone per aspirare la sospensione cellulare all'interno del sensore.Lo stantuffo agisce come un segnale elettrico e aspirerà il campione insieme al volume morto nel sensore. La velocità o l'accuratezza dell'aspirazione non sono importanti, a differenza della pipettaggio. Questo processo richiederà diversi secondi quando sarà pronto.Lo strumento emetterà un segnale acustico e sullo schermo verrà visualizzato il campione caricato. Una volta caricato il campione nel sensore, questo viene aspirato attraverso la zona di rilevamento per valutare le dimensioni cellulari e il volume cellulare. Successivamente, attraverso i microcanali, quando vengono conteggiati 50 microlitri di campione, il sensore indica allo strumento di interrompere il conteggio.Al termine del conteggio, lo schermo dello strumento indicherà "conteggio completato". Si prega di rimuovere il sensore e smaltirlo. Seguire il messaggio visualizzato per rimuovere e smaltire il sensore.Lo strumento mostrerà quindi un istogramma della dimensione o del diametro delle cellule sul suo schermo, insieme alla concentrazione cellulare per millilitro. Al termine del conteggio e quando l'istogramma viene visualizzato sullo strumento, applicare le porte premendo il pulsante di attivazione, selezionare l'impostazione automatica delle porte oppure usare l'opzione precedente per impostare automaticamente la porta in base al profilo dell'istogramma o per utilizzare le porte del conteggio precedente. Indipendentemente dalla scelta effettuata, le porte possono essere spostate manualmente per un aggiustamento fine.Regolare i dati, premere nuovamente il pulsante di attivazione per selezionare la porta sinistra e scorrere l'interruttore per spostare la porta nella posizione desiderata. Quindi premere di nuovo l'interruttore per attivare la porta destra e scorrere l'interruttore per posizionare la porta destra. Fare clic nuovamente.Verranno visualizzate una nuova concentrazione cellulare, volume cellulare medio e diametro. L'interruttore può essere spostato su entrambi i lati per alternare la visualizzazione tra data e ora, dimensione media delle cellule e volume medio delle cellule; fino a 72 istogrammi possono essere memorizzati direttamente sullo strumento. Per caricare i dati su un computer personale, collegare lo strumento tramite la porta del cavo USB, sullo schermo del display del pc.Fare doppio clic sull'applicazione software scepter per avviare il programma. Quindi fare clic su connetti. Tutti i conteggi verranno trasferiti automaticamente al software.Il software di applicazione scepter visualizza l'istogramma che illustra la distribuzione della popolazione della coltura in termini di volume o diametro. I file scaricati possono quindi essere esportati in Microsoft Excel, dove i dati grezzi verranno visualizzati in classi di diametri cellulari o volumi cellulari specificati. Sono state preparate 19 diverse linee cellulari per il conteggio e le concentrazioni iniziali teoriche sono state determinate utilizzando un contatore aculter.Queste sospensioni cellulari sono state quindi ulteriormente diluite per ottenere sospensioni cellulari con concentrazioni cellulari teoriche. Il contatore cellulare Scepter è stato quindi utilizzato per determinare le concentrazioni cellulari. Questa figura mostra cinque diluizioni misurate per cinque linee cellulari rappresentative insieme alla concentrazione cellulare teorica.L'elevato grado di linearità, indicato dai valori di r-quadro, dimostra che il conteggio con scepter è un metodo affidabile per le linee cellulari testate su un ampio intervallo lineare di funzionamento. L'accuratezza relativa complessiva del conteggio con scepter è qui dimostrata, confrontando i dati ottenuti dal conteggio con scepter con quelli ottenuti dal conteggio con coter. Il logaritmo dei conteggi cellulari con scepter è riportato in funzione del logaritmo dei conteggi con coter e mostra che, per tutte le linee cellulari testate, i conteggi con scepter corrispondono ai conteggi con coter.I conteggi di 19 linee cellulari sono stati effettuati utilizzando un contatore coulter Z two. Il contatore cellulare Scepter, un contatore automatizzato basato sulla visione, come il sistema di conteggio V cell o il sistema di prova count test, e i conteggi hemo TER sono stati eseguiti secondo le istruzioni del produttore, utilizzando la stessa sospensione iniziale di cellule e diluizioni identiche. I risultati mostrati in questa figura dimostrano che le concentrazioni cellulari misurate mediante il conteggio con Scepter corrispondono strettamente alle concentrazioni cellulari teoriche con elevata linearità.Il coefficiente percentuale di variazione o CV è stato calcolato per ogni diluizione di ciascuna linea cellulare. Per ciascun sistema di conta qui mostrato, sono riportati i valori medi dei CV percentuali su 19 linee cellulari in relazione alla concentrazione cellulare e al metodo di conta all'interno del range operativo. Il contatore cellulare Scepter è più preciso della conta con emocitometro, mostrando deviazioni standard minori e coefficienti di variazione medi più bassi.Il conteggio con Scepter è 10 volte più veloce della citometria ematica e più rapido anche rispetto ad altri contatori automatici. Qui le cellule SF nine, MCF seven e HC 2 93 sono state contate utilizzando i metodi descritti in questo video. È stato registrato il tempo medio necessario per misurare la concentrazione cellulare.Si noti che la citometria ematica &egrave; stata eseguita una sola volta per ogni campione. Scepter effettua misurazioni in base alla dimensione cellulare. Pertanto, eventuali modifiche nella morfologia cellulare possono essere rilevate nell'istogramma.Le colture sane mostrano una bella distribuzione gaussiana a forma di campana, mentre le cellule non vitali muoiono e causano uno spostamento dell'istogramma verso sinistra. Analogamente, quando una popolazione composta al 50% da cellule morte è stata mescolata con il 50% di cellule vive, sono stati osservati spostamenti nell'istogramma. Vi ho appena mostrato come utilizzare il nuovo contatore cellulare Scepter di Millipore, che sta rivoluzionando il modo in cui i ricercatori contano le proprie cellule.

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