Name: Protocollo per Plasmodium falciparum infezioni in Fenotipo Determinazione Zanzare e infezione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 10 s
Description: Impara a determinare il fenotipo di infezione da Plasmodium falciparum nelle zanzare Anopheles gambiae mediante colture di gametociti e alimentazione a membrana. Questo protocollo permette di studiare la trasmissione della malaria.

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A. Preparazione della cultura gametocyte: <ol><li> Portare fresco sangue umano e nel siero a 37 ° C in un bagno d&#39;acqua. </li><li> In una cappa aspirante, in condizioni sterili, pipettare 1 ml di sangue caldo in una provetta Eppendorf. Spin il sangue in una centrifuga per 5 minuti a 2200 giri al minuto. Eritrociti dovrebbero essere trasformati in pellet; rimuovere ed eliminare il siero chiaro. Lavare erythocytes con un uguale volume di nuovo siero 3 volte per ottenere il sangue intero per la gametociti. </li><li> Recuperare la cultura gametocyte dal CO 2 incubatore o portacandele. Questa cultura deve essere mantenuta in RPMI media e alimentato le zanzare nel giorno 16 della cultura. Per determinare la gametocytemia% (il giorno 16 della cultura), preparare uno striscio sottile su un vetrino con una goccia di sangue e di eseguire una Geimsa macchia. Determinare il numero di gameti in un campo della cultura parassita. Di solito è nel range di 2 - 4%. Calcolare il volume di sangue intero che sarà necessario per ottenere il desiderato gametocytemia% finale (0,3 -1%). </li><li> Rimuovere la maggior parte dei media dalla vostra cultura gametocyte utilizzando una pipetta, facendo attenzione a non disturbare o aspirare i parassiti (parassiti apparirà come nero, mentre il supporto verrà rosa chiaro / rosso). Pipettare il resto dei media e parassiti in una provetta da 15 ml falco. Spin in una centrifuga per 5 minuti a 2200 giri al minuto. Parassiti e eritrociti si pellet, rimuovere e scartare i media sopranatante senza disturbare i parassiti. </li><li> Combina i parassiti con il volume di preparato sangue intero (da A2 passo) per darvi la gametocytemia finale desiderato in base ai calcoli precedenti. Pipetta per mescolare completamente. (~ 1 minuto) </li></ol> Questo è ora il campione si feed al tuo zanzare. Mantenere a 37 ° C in un bagnomaria. B. Alimentazione zanzare: <ol><li> Metti il tuo zanzare Anopheles (~ 30-50) in cera alberato bicchieri di carta coperto con rete rete protetta da un elastico o coperchio di cartone forniti con tazza. Usiamo un a batteria Aspiratore per questo passo. </li><li> Preparare la circolazione bagnomaria con l&#39;inserimento di ugelli su entrambi i lati di alimentatori di vetro per tubi in gomma. Collegare come alimentatori di cui hai bisogno in una serie, una fine della serie devono essere collegati da tubi al circolatore del bagnomaria (la parte che spinge l&#39;acqua attraverso gli alimentatori), l&#39;altra estremità della serie dovrebbe essere costituito da tubi di gomma immersi nella vasca da bagno per permettere all&#39;acqua circolare per svuotare di nuovo in bagno. Accendere il bagno fino a quando l&#39;acqua è di circa 37 ° C e l&#39;acqua circola attraverso gli alimentatori e di nuovo al bagno. Ciò è essenziale per mantenere il sangue caldo e mantenere i parassiti vivi. </li><li> Preparare la membrana (usiamo piccoli quadrati di distese parafilm) con l&#39;alimentatore che si estende intorno membrana di vetro, utilizzando la pressione per sigillare ermeticamente l&#39;apertura di alimentazione. Questa membrana sarà imitare la pelle. </li><li> Posizionare un alimentatore membrana rivolto verso il basso su ogni tazza di zanzara e alimentatori sicuro utilizzando fascette o nastro. La membrana deve sedersi a filo con la rete in modo zanzare può accedere dall&#39;interno della coppa. </li><li> Con attenzione pipetta parassita-farina di sangue (da A5 passo) nel collo dell&#39;alimentatore, assicurandosi che il sangue va tutto il senso attraverso il collo nel serbatoio, contattando la membrana in modo le zanzare possono accedere al sangue. Utilizziamo circa 200 ml di sangue per alimentatore, ma questo può variare. </li><li> Permettono di nutrire le zanzare. Permettiamo loro di mangimi per ≈ 30 minuti (variabile, a seconda theexperiment; per la maggior parte degli esperimenti, a volte monitoraggio quanti hanno già preso un pasto guardando il contenuto di sangue in addome). </li><li> Dopo l&#39;alimentazione, togliere alimentatori dalle coppe zanzara. Spegnere il bagno d&#39;acqua e staccare alimentatori da tubo. </li><li> Rimuovere la membrana alimentatori e immergersi nel 10% di candeggina per decontaminare e sciacquare con acqua. Luogo materiale contaminato (membrane, asciugamani di carta, guanti, ecc) in una piccola borsa rischio biologico e depositare in un recipiente di grandi dimensioni a rischio biologico. </li><li> Anestetizzare le zanzare mettendo coppe in frigo o in camera fredda. Una volta che le zanzare sono completamente anestetizzati, trasferirli su una piastra di Petri incorporato in un secchiello del ghiaccio. Ordina zanzare, guardando attentamente l&#39;addome per qualsiasi segno di un pasto di sangue, e scartare quelli che non sono stati caricati. Alcune zanzare sarà completamente gonfio mentre altri mostrano una stretta banda di sangue ingerito, tutti sono accettabili come &quot;nutriti&quot;. Mettere le zanzare reimmessa nelle tazze di cartone. </li><li> Fornire un pasto zucchero (un pezzo di cotone imbevuto di 10% saccarosio) alle zanzare, e incubare in normali condizioni insectary per 7 giorni. Ogni giorno, le zanzare devono essere monitorati per il tasso di mortalità. Inoltre, il cotone dovrebbe essere bagnato con il saccarosio, in modo che non siano privati ​​di cibo. E &#39;meglio, ancora, per aggiungere un tovagliolo di carta imbevuto di acqua distillata, per mantenere le zanzare umido. Queste zanzare sono P. falcipraum infetti, in modo che tutti la cura deve essere presa in modo che le zanzare non possono ESCAPe dalla tazza. E &#39;meglio mettere le tazze in una protezione cagefor piccolo doppio. </li></ol> C. Dissecting midguts zanzara e la stima dei carichi oocisti: <ol style="margin-top: 0in"><li style="tab-stops: list .5in"> Aspirare zanzare (dal passaggio B) da bicchieri di carta con un aspiratore a batteria. Anestetizzare le zanzare, che sono all&#39;interno del serbatoio estraibile aspiratore, passando a una stanza fredda o seppellire il serbatoio in ghiaccio per almeno 5 minuti o fino a quando le zanzare si fermano. </li><li style="tab-stops: list .5in"> Trasferimento zanzare anestetizzati dal serbatoio di un piatto di vetro Petri incorporati nel ghiaccio. Diffondere le zanzare per un singolo strato e coprire con un coperchio di plastica capsula di Petri. Zanzare che non possono essere ospitati sul piatto rimangono nel serbatoio, che viene restituita alla camera fredda o ghiaccio. </li><li style="tab-stops: list .5in"> Utilizzando pinze a punta fine, il trasferimento di una zanzara dal piatto a 100 ul di PBS contenute su un vetrino montato sotto un microscopio dissezione. Lasciare gli altri coperti nel piatto freddo di Petri. </li><li style="tab-stops: list .5in"> Utilizzando pinze a punta fine, tenere le zanzare al torace e l&#39;addome posteriore. Tirare il corpo senza fino a quando il midgut è esposto. Usare pinze per rimuovere il tessuto in eccesso dal budello gut.The appare come un bianco, sac-come corpo. Rimuovere il tessuto in eccesso dal gut.Mount l&#39;intestino in un pozzetto di un 12-ben vetrino e immergere in 5-10 microlitri di 0.2% mercurocromo. Squash e gettare la carcassa in towel.Continue carta umida per altre zanzare fino al 12-scivolo bene è pieno. Coprire il coraggio montato con un coprioggetto di vetro. </li><li style="tab-stops: list .5in"> Esaminare fegato al microscopio ottico, alla ricerca di oocisti rotonda che macchia rosa brillante contro il chiaro / tenue tessuto intestinale rosa. Conte oocisti, registrare e continuare con il campione successivo. Proseguire per tutte le zanzare da tutti i trattamenti sperimentali. </li><li style="tab-stops: list .5in"> Al termine, asciugare vetrino pulito con un tovagliolo di carta. Posizionare il tovagliolo di carta con le budella, e tovagliolo di carta con le carcasse, in piccolo sacchetto e gettarlo nella spazzatura. I guanti sono indossati in tutto procedura. Si fa attenzione a non lasciare alcuna fuga le zanzare infette. </li></ol>

<ol><li>Avila, S. L., Ferreira, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malaria+diagnosis%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+J+Med+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">Malaria diagnosis: a review.</a> Braz J Med Biol Res. 29 (4), 431-443 (1996).</li>
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Ci possono essere delle variazioni in Plasmodium l&#39;infezione e il fenotipo determinazione infezione e laboratori diversi possono seguire diverse tecniche.

protocollo per plasmodium falciparum infezioni in fenotipo determinazione zanzare e infezione

Protocol for Plasmodium falciparum Infections in Mosquitoes and Infection Phenotype Determination

Una volta che un gene è identificato come potenzialmente refrattaria per la malaria, deve essere valutato per il suo ruolo nella prevenzione delle infezioni da Plasmodium all&#39;interno della zanzara. Questo protocollo illustra come l&#39;entità delle infezioni plasmodio di zanzare possono essere analizzati. Le tecniche per la preparazione della coltura gametocyte, nutrendosi di sangue umano membrana zanzare, e saggio titoli virale nel midgut zanzara sono dimostrati.

Protocollo per Plasmodium falciparum infezioni in Fenotipo Determinazione Zanzare e infezione

Una volta che un gene è stato identificato come potenzialmente refrattario alla malaria, deve essere valutato per il suo ruolo nella prevenzione delle infezioni da Plasmodium all'interno del...

Sono George Dimopoulos presso l'Istituto di Ricerca sulla Malaria della Johns Hopkins School of Public Health, e ora vi mostrerò un procedimento per infettare zanzare Anopheles gambiae con parassiti Plasmodium falciparum e per determinare il fenotipo di infezione nell'intestino medio della zanzara. Per questo procedimento, l'equipaggiamento di base necessario comprende un incubatore a CO2 per la coltura dei parassiti. In alternativa, se non si dispone di un incubatore a CO2, è possibile utilizzare un barattolo con candela.Abbiamo anche bisogno di un insetticoltura, ovviamente, e di attrezzature standard di biologia molecolare e biologia cellulare come microscopi per dissezioni e microscopi ottici. Abbiamo bisogno di bagni termostatici. Abbiamo bisogno di un sistema di alimentazione di membrana per zanzare e di centrifughe.Ciao, mi chiamo ISH e sono nel laboratorio del Dottor George Depos. Sono un ricercatore postdottorato. Il mio nome è Lindsay Garver e sono una studentessa di dottorato.Il primo passaggio dell'infezione con plasmide consiste nel preparare la coltura del plasmide. Se non si dispone di un'incubatrice a anidride carbonica, è possibile utilizzare un barattolo con candela all'interno del quale si posiziona la piastra a sei pozzetti contenente la coltura del ceppo gatto, quindi si accende la candela e si sigilla il barattolo. Il primo passaggio prevede di procurarsi sangue umano fresco e siero umano, ponendoli prima a 37 °C in un bagno d'acqua per scongelarli e mantenerli caldi, poiché è necessario utilizzare sangue e siero ben caldi.Per preparare il sangue, è necessario prelevare un campione di sangue umano fresco da un animale in un eppendorf. Sì, il sangue fresco deve essere centrifugato a 2000 giri al minuto per cinque minuti per separare gli eritrociti. Al termine della centrifugazione, il sopranatante limpido deve essere eliminato e il pellet rosso, costituito dai globuli rossi (RBC), deve essere lavato tre volte nel siero umano.Aggiungiamo un volume uguale di siero umano al pellet, mescoliamo e centrifughiamo nuovamente a 2000 giri/min per cinque minuti. Questo passaggio viene ripetuto tre volte. Infine, si ottengono pellet di globuli rossi pronti per essere aggiunti alla coltura di ganote.Ok, la coltura di plasmodio, che si trova nell'incubatrice a CO2, deve essere mantenuta in mezzo RPMA per 16 giorni e, al giorno 16, sarà pronta per l'infezione. Poiché stiamo lavorando con la coltura di plasmodio, è necessario adottare precauzioni a ogni passaggio. Il primo passaggio consiste nel coltivare i parassiti in un laboratorio di livello BC2 e l'operazione deve essere eseguita all'interno di una cappa.Tutte le punte dei pipet e tutti gli accessori usati devono essere smaltiti in un contenitore per rifiuti biologici, mentre tutte le altre soluzioni, come il nostro pipetman, devono essere lavate con una soluzione di candeggina al 10% e si devono indossare guanti. I camici da laboratorio della coltura del giorno 16 devono prelevare una piccola goccia di sangue su un vetrino, preparare uno striscio e procedere con una colorazione, quindi osservarlo al microscopio ottico.È possibile determinare la percentuale di GAMMAT a partire da una coltura di gametociti di 16 giorni. Rimuovere la maggior parte del mezzo, avendo cura di non disturbare né aspirare i parassiti, che si trovano facilmente sul fondo del pozzetto; lasciare il resto del mezzo e dei parassiti. Mescolare i parassiti nei globuli rossi in una provetta, quindi trasferire la sospensione in una centrifuga e centrifugare a 2000 giri al minuto per cinque minuti.Dopo la centrifugazione, i parassiti formeranno un pellet insieme ai globuli rossi. Il sopranatante è il mezzo RPMI, mentre sul fondo il pellet contiene i parassiti. Insieme ai globuli rossi, rimuovere il liquido, ovvero il RPMI.È necessario prestare attenzione al mezzo per non disturbare il parassita e i globuli rossi. La percentuale di GATOT, determinata dai GIMs 10, è solitamente compresa tra il 2 e il 4%. Una volta che i globuli rossi e i parassiti sono pronti dopo la centrifugazione, vengono mescolati insieme e il volume di sangue da aggiungere viene determinato in base alla percentuale finale di GATOT. Deve essere acuta e di solito è compresa tra lo 0,3 e l'1%, ed è ciò che verrà utilizzato per l'alimentazione delle zanzare fisiche.Per l'infezione da Presidium S, questo è un alimentatore in vetro, che utilizziamo per l'alimentazione attraverso membrana per le zanzare. Inseriamo il sangue attraverso il piccolo foro che vedete, e questo viene contenuto all'interno. Sul fondo laterale sono presenti due ugelli, collegati al nostro bagno termico, menzionato a 37 gradi.Per preparare l'alimentatore per l'alimentazione, prendiamo un piccolo pezzo di affil. Lo stendiamo tirando dalle due estremità su tutti e quattro i lati, quindi lo posizioniamo sul lato aperto del beccuccio di vetro in modo da formare un sottile strato di membrana simile alla pelle. Questo è ciò che viene chiamato alimentazione tramite membrana.Questo è un bagnomaria circolante, che mantiene l'acqua a 37 °C e la circola attraverso l'alimentatore di vetro in modo che il sangue rimanga caldo a 37 °C. Colleghiamo quindi l'alimentatore di vetro attraverso i piccoli capillari e lo connettiamo al bagnomaria circolante, accendendo il bagnomaria affinché l'acqua circoli; l'acqua e il sangue non si mescolano mai poiché si trovano in due camere separate. Questo è un piccolo contenitore contenente le zanzare *phs Gambi*.Per iniziare, il beccuccio in vetro viene posizionato sulla gabbia e un peso viene appoggiato sul beccuccio in vetro in modo che la membrana, ovvero il phim, sia perfettamente a filo con la rete a maglie. Circa 200 microlitri di sangue, contenente i parassiti, con la percentuale richiesta di gambotto vengono aggiunti al beccuccio, assicurandosi che il sangue raggiunga completamente il fondo in modo che le zanzare possano accedervi.Il pasto viene proseguito per circa 30 minuti. Una volta completato il pasto, il distributore di vetro viene lavato accuratamente in acqua e in soluzione al 10% di candeggiante, mentre tutte le membrane e il nastro adesivo vengono rimossi e smaltiti nel contenitore per rifiuti biologici. Dopo il pasto ematico, i campioni di zanzare non alimentati devono essere separati da quelli che si sono alimentati.Per fare ciò, abbiamo anestetizzato le zanzare ponendo i piccoli bicchieri contenenti le zanzare alimentate con sangue in una stanza fredda per cinque-dieci minuti. Come possiamo vedere, le zanzare sono già stordite dal freddo. Apriamo il coperchio e trasferiamo le zanzare in una piccola capsula di Petri, posta su un secchiello di ghiaccio in modo che rimangano fredde per tutto il tempo e non possano scappare.Ricordare che si tratta di zanzare infette da plasmodio, quindi si deve fare la massima attenzione a non farle volare via. Una volta che le zanzare sono state stordite nella stanza fredda, le trasferiamo nell'allevamento normale per insetti, che è mantenuto a temperatura ambiente, ma poniamo sempre le zanzare in una capsula di Petri, la quale viene tenuta in un secchiello con ghiaccio, in modo che rimangano continuamente stordite. Si può vedere come le zanzare alimentate possano essere separate da quelle non alimentate.Quelli sazi hanno sangue al loro interno. Sono completamente distesi. Alcuni di essi si sono nutriti parzialmente di sangue, quindi non sono completamente distesi.Hanno una piccola quantità di sangue nell'addome, mentre altri ne hanno una grande quantità. Gli UNFI non hanno alcun sangue nell'addome, quindi è possibile distinguere facilmente tra quelli nutriti e quelli non nutriti. Illustrati qui ci sono i esemplari femmina adulti di zanzare che si sono nutriti di sangue; trasferiremo quindi queste zanzare dalla capsula di Petri ai bicchieri di cartone rivestiti con cera.Dopo aver messo le zanzare che si sono alimentate di sangue nei bicchieri, abbiamo aggiunto un piccolo pezzo di cotone inumidito con soluzione di saccarosio al 10% affinché possano nutrirsi dello saccarosio al 10% per i successivi sette giorni di incubazione; inoltre, è stato inserito un piccolo tovagliolo di carta piegato per mantenere l'umidità all'interno del bicchiere, che è stato poi coperto con una capsula di Petri. Le zanzare infettate con Plasmodium vengono collocate in un'altra piccola gabbia, che deve essere dotata di doppia protezione, e la gabbia viene posta in un laboratorio di livello di sicurezza 3, mantenuto a 27 gradi Celsius e al 80% di umidità. Sette giorni dopo l'alimentazione con sangue, le zanzare precedentemente conservate nell'insettoario, all'interno di una scatola con doppia gabbia, vengono prelevate dall'insettoario e portate nella stanza fredda per stordire le zanzare.Dopo che i moscerini sono stati abbattuti, vengono trasferiti in una capsula di Petri, che viene mantenuta su un secchiello con ghiaccio. Ora ci stiamo preparando a dissezionare i moscerini. Procederemo con la dissezione dell'intestino medio e cercheremo la cisti.Il primo passo consiste nell'aggiungere cento microlitri di PBS su un vetrino posizionato su un microscopio stereoscopico. Il passo successivo prevede l'uso di una pinzetta. Si trasferisce un singolo esemplare di zanzara dalla capsula di Petri al PBS presente sul vetrino montato sul microscopio stereoscopico.Gli altri sono ancora lasciati sulla piastra di Petri fredda. Per dissezionare le zanzare, tenere le zanzare nel torace con una delle pinzette e l'addome posteriore con un'altra pinzetta. Quindi tirare lentamente la parte del corpo fino a quando l'intestino medio non è esposto.Sembra un sacco bianco, utilizzare pinzette per rimuovere il tessuto in eccesso e le altre parti del corpo. Sì, questo è il mesentero, che appare come un corpo simile a un sacco bianco, che possiede l'os. Trasferiremo ora questo mesentero in una piastra in vetro a 12 pozzetti e lo immergeremo in 5-10 microlitri di micropro allo 0,2%, che permetterà al mesentero di aderire al vetrino.Con il coprioggetto, eseguiamo questo passaggio per tutte le zanzare infette. L'intestino appare di un rosa brillante e trasferiremo questo vetrino a un microscopio ottico per contare il carico di OS. Ora stiamo osservando l'intestino medio dissezionato dalle zanzare infette.L'intestino medio appare come un corpo allungato e, con la colorazione rom, ha un colore leggermente tendente al rosa; l'SST invece dovrebbe presentarsi di un rosa brillante rispetto al tessuto intestinale pallido. Questi intestini medi provengono da zanzare infette, ma non mostrano alcun SST, quindi potrebbero non essere infetti. Tuttavia, se un intestino medio fosse stato infetto, l'SST sarebbe apparso come un piccolo cerchio di colore rosa brillante, e potrebbero esserci numerosi focolai, talvolta compresi tra 22 e 500, all'interno di un singolo intestino medio.Questa procedura prevede l'infezione del sangue umano con parassiti Plasmodium, la somministrazione di tale sangue infetto a zanzare Anopheles gambiae, la dissezione dell'intestino medio di tali zanzare e la determinazione dei conteggi di oocisti nell'intestino medio infetto. Questa tecnica è importante perché rappresenta l'approssimazione più fedele della trasmissione della malaria umana che possiamo riprodurre in laboratorio.

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Protocollo per la produzione di un incrocio fra i roditori parassiti della malaria

Le zanzare che trasmettono la malaria hanno una serie di caratteristiche epidemiologicamente importanti che possono essere rilevate solo utilizzando tecniche molecolari. Utilizzando una piattaforma di genotipizzazione SNP basata su MALDI-TOF, abbiamo sviluppato un test per rilevare simultaneamente più tratti chiave (specie, resistenza agli insetticidi, infezione da parassiti e scelta dell'ospite) dei vettori della malaria.

Un test multi-rilevamento per la malaria Trasmissione Zanzare

Descriviamo un modello murino di malaria cerebrale sperimentale e mostriamo come la patologia infiammatoria e microvascolare possa essere monitorata in vivo utilizzando la risonanza magnetica.

Tracciamento in vivo di sviluppo dell&#39;edema e patologia microvascolare in un modello di malaria cerebrale sperimentale mediante l&#39;utilizzo di immagini a risonanza magnetica

A causa delle sorprendenti somiglianze del ciclo di vita e della biologia dei parassiti della malaria dei roditori con i parassiti della malaria umana, i modelli di malaria dei roditori sono diventati indispensabili per la ricerca sulla malaria. Qui, abbiamo standardizzato alcune delle tecniche più importanti utilizzate nell'analisi fenotipica di specie di malaria roditore selvatico e transgenico.

Phenotypic Analisi del roditore Malaria Parassita Sessuale e Sessuale Fasi Sangue e Mosquito Fasi

Indagini dettagliate sugli stadi delle zanzare dei parassiti della malaria sono fondamentali per progettare efficaci strategie di blocco della trasmissione. Questo protocollo dimostra come coltura efficacemente gametociti infettivi e quindi nutrire questi gametociti alle zanzare per generare stadi di zanzara di P. falciparum.

Plasmodium falciparum Coltura di gametociti e infezione da zanzare attraverso l'alimentazione artificiale della membrana

Questo protocollo descrive un test di immunoassorbimento enzimatico a sandwich per rilevare gli sporozoiti delle ghiandole salivari nelle zanzare. Utilizzando anticorpi monoclonali facilmente disponibili, il metodo consente di rilevare in modo economico e ad alto rendimento le zanzare portatrici di Plasmodium falciparum o Plasmodium vivax. Il metodo è adatto per la ricerca sulla trasmissione della malaria, comprese le indagini sui vettori.

Rilevamento di Plasmodium Sporozoites nelle zanzare Anopheles utilizzando un test di immunoassorbimento enzimatico

Il test standard di alimentazione a membrana (SMFA) è considerato il gold standard per la valutazione e l'identificazione di potenziali composti antimalarici. Questo sistema di alimentazione artificiale viene utilizzato per infettare le zanzare per valutare ulteriormente gli effetti di tali composti sull'intensità e la prevalenza del parassita Plasmodium falciparum .

Test standard di alimentazione a membrana per la rilevazione dell'infezione da Plasmodium falciparum in vettori di zanzare Anopheles

La malaria si trasmette attraverso l'inoculazione dello stadio sporozoite di Plasmodium da parte di zanzare infette. Il Plasmodium transgenico ci ha permesso di comprendere meglio la biologia della malaria e ha contribuito direttamente agli sforzi di sviluppo del vaccino contro la malaria. In questo articolo descriviamo una metodologia semplificata per generare sporozoiti transgenici di Plasmodium berghei .

Generazione di sporozoiti geneticamente modificati di Plasmodium berghei

La genetica chimica prevede la sostituzione di un residuo gatekeeper con un amminoacido contenente una catena laterale diversa nel locus bersaglio. Qui, abbiamo generato un parassita mutante contenente un allele ipomorfico di cdpk1 e identificato le vie compensatorie adottate dal parassita nel background mutante.

Comprensione dello sviluppo di vie compensatorie in un parassita mutante della malaria che ospita allele ipomorfico di chinasi simili alle piante

Lo sviluppo sessuale del Plasmodium avviene nell'intestino medio della zanzara. Prendere di mira le fasi sessuali del parassita è una strategia promettente per bloccare la trasmissione. Abbiamo sviluppato Ookluc, un P. berghei transgenico che esprime nanoluciferasi dopo la formazione dello zigote, consentendo lo screening ad alto rendimento di composti che bloccano la trasmissione. Questo articolo descrive in dettaglio i metodi per lo screening utilizzando Ookluc.

Ookluc: una linea di Plasmodium berghei per l'identificazione di composti che bloccano la trasmissione

Impara a determinare il fenotipo di infezione da Plasmodium falciparum nelle zanzare Anopheles gambiae mediante colture di gametociti e alimentazione a membrana. Questo protocollo permette di studiare la trasmissione della malaria.

Protocollo per Plasmodium falciparum infezioni in Fenotipo Determinazione Zanzare e infezione

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