Valutazione degli effetti neuroprotettivi di un composto di prova contro la tossicità dell'alfa-sinucleina nei neuroni embrionali di ratto

Inizia con una coltura primaria del mesencefalo da embrioni di ratto, contenente neuroni dopaminergici che sovraesprimono l'alfa-sinucleina mutata.

Sostituire il terreno nei pozzetti di trattamento con un terreno nuovo contenente il composto in esame e quello nei pozzetti di controllo con un terreno semplice. Quindi incubare.

Nel controllo, l'alfa-sinucleina forma aggregati tossici nei neuroni dopaminergici, causando la retrazione dei neuriti e portando alla morte neuronale.

Nel trattamento, il composto in esame interagisce con l'alfa-sinucleina, ne impedisce l'aggregazione, preserva la struttura dei neuriti e fornisce neuroprotezione.

Fissare e permeabilizzare le cellule, quindi bloccare i siti di legame non specifici.

Incubare con anticorpi primari per marcare tutti i neuroni, con marcatura aggiuntiva per i neuroni dopaminergici.

Lavare le cellule e aggiungere anticorpi secondari marcati con fluorofori specifici per gli anticorpi primari.

Utilizzando un microscopio a fluorescenza invertita, conta i neuroni dopaminergici marcati in modo differenziale, quindi passa a un microscopio confocale per misurare la lunghezza dei neuriti.

Un numero più elevato di neuroni dopaminergici con neuriti intatti nel trattamento rispetto ai controlli conferma il potenziale neuroprotettivo del composto in esame.