Somministrazione virale mirata ai neuroni corticospinale in un ratto neonatale per studiare la lesione del midollo spinale
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:32 min. • August 29th, 2025
Inizia con un ratto neonatale anestetizzato con un midollo spinale cervicale esposto chirurgicamente.
A questo ratto è stato iniettato un virus anterogrado che codifica per un recettore di progettazione e una proteina fluorescente che il virus prende di mira i neuroni del tratto corticospinale (CST) nella corteccia somatomotoria del cervello.
Identificare la linea mediana del midollo spinale utilizzando l'arteria spinale.
Posizionare un ago di vetro contenente un virus retrogrado, che codifica per un enzima ricombinasi, dietro la lamina spinale bersaglio dove risiedono i terminali degli assoni CST.
Abbassare l'ago nel midollo spinale e iniettare il virus.
Lasciare che il virus si diffonda, quindi ritirare lentamente l'ago e suturare l'incisione.
Il virus entra nel terminale dell'assone CST e viaggia retrogradamente verso il corpo cellulare, dove esprime l'enzima ricombinasi.
Questo enzima attiva il transgene veicolato dal virus anterogrado, consentendo l'espressione del recettore progettista e della proteina fluorescente solo nei neuroni doppiamente infettati. Questo metodo consente un'analisi mirata dei neuroni CST nelle lesioni del midollo spinale.
Per le iniezioni dirette nel midollo sp
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