JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:24 min. • August 29th, 2025
Inizia con un topo anestetizzato su un telaio stereotassico con la testa inclinata.
Un'incisione del cuoio capelluto nel topo espone la dura madre che copre la cisterna magna, uno spazio pieno di liquido cerebrospinale o liquido cerebrospinale tra il cervelletto e il tronco encefalico.
Usando una pinza, afferra la dura madre e crea una piccola apertura per accedere alla cisterna magna.
Utilizzare un tampone sterile per rimuovere il liquido cerebrospinale in eccesso.
Identificare il punto di riferimento anatomico in cui il midollo spinale si collega al tronco encefalico, quindi determinare le coordinate stereotassiche.
Abbassare il braccio stereotassico che tiene la micropipetta, che contiene la soluzione terapeutica.
Far avanzare la micropipetta attraverso la cisterna magna nel tronco encefalico alle coordinate predeterminate.
Iniettare la soluzione lentamente e tenere brevemente premuta la pipetta per evitare il riflusso.
La soluzione terapeutica raggiunge direttamente le regioni del tronco encefalico e del midollo spinale superiore, che sono difficili da raggiungere con i metodi stereotassici standard.
Visualizza la superficie dorsale del tronco encefalico con punti di riferimento dettagliati attraverso la dura madre aperta.
Usa la pinza angolata per afferrare la dura madre che si estende dall'osso occipitale all'atlante, quindi usa le forbici a molla per creare una piccola apertura di circa 0,5-1,5 millimetri nella dura dura. Una volta aperta la dura madre, drenare il liquido cerebrospinale in eccesso con un cotton fioc sterile. L'obex, il punto in cui il canale centrale si apre nel quarto ventricolo, è il punto zero standard antero-posteriore e mediolaterale.
Posizionare la pipetta o la siringa sul bersaglio utilizzando il braccio stereotassico. Abbassare il braccio della dorsale sulla superficie dorsale che si forma dal punto zero dorso-ventrale. Quindi abbassare la pipetta sul tronco encefalico e iniettare la soluzione.
Lasciare l'ago in posizione da uno a cinque minuti dopo l'iniezione per evitare la formazione di tracce dell'ago quando si utilizzano volumi compresi tra 3 e 50 nanolitri. Quindi sollevare la pipetta o la siringa utilizzando il braccio stereotassico e ripetere l'operazione per più target.