JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:47 min. • August 29th, 2025
Fissare un topo in una cornice stereotassica con un cervello esposto chirurgicamente contenente uno sferoide di glioblastoma pre-impiantato.
Applicare soluzione salina sul cervello esposto per mantenere l'idratazione dei tessuti.
Posizionare la sonda flessibile sullo strato salino, assicurandosi che i suoi cuscinetti di contatto poggino sul retro del mouse e che gli elettrodi siano allineati sopra il glioblastoma.
La sonda è costituita da un substrato polimerico sottile e flessibile con elettrodi d'oro modellati rivestiti con polimero conduttivo biocompatibile, che garantisce prestazioni elettriche ottimali e compatibilità tissutale.
Assorbire la soluzione salina in eccesso, lasciando solo uno strato sottile.
Applicare l'adesivo siliconico per stabilizzare gli elettrodi, quindi posizionare un vetro di copertura.
Applicare del cemento dentale attorno al vetro di copertura e fissare i cuscinetti di contatto alla parte posteriore del mouse.
Costruire un pozzo di cemento per l'inserimento del fluido.
Successivamente, somministrare l'analgesia post-chirurgica e mantenere il supporto termico per il recupero del topo.
Gli elettrodi impiantati erogano impulsi elettrici al di sopra del glioblastoma per una terapia mirata con campo elettrico pulsato in applicazioni neuroterapeutiche.
Posiziona una goccia di DPBS per coprire la craniotomia. Posizionare l'elettrodo flessibile sulla goccia di DPBS e posizionare delicatamente la parte posteriore della sonda con i cuscinetti di contatto sul retro del mouse. Assorbire la goccia DPBS con un piccolo pezzo di carta fino a quando la sonda non può appoggiarsi sulla dura madre e seguire la curvatura del cervello, assicurandosi che il piccolo strato di soluzione salina rimanga sotto gli elettrodi per fungere da barriera contro la fuoriuscita di colla.
Posizionare una piccola goccia di adesivo siliconico sulla sonda e coprirla con un vetro di copertura rotondo da cinque millimetri. Spingere il vetro di copertura verso il basso fino a quando il silicone non è distribuito uniformemente e la distanza tra il vetro di copertura e la sonda è minima. Quindi attendere 30 secondi affinché il silicone si solidifichi.
Per fissare il vetro di copertura, applicare rapidamente la supercolla sui lati e spingerla verso il basso fino a quando la colla non diventa solida. Applicare la super colla sul collo della sonda usando uno stuzzicadenti, facendo attenzione che la super colla venga tirata sotto il collo per fornire un supporto stabile. Copri il cranio con cemento dentale per creare un tappo cronico e fai particolare attenzione a coprire solo i bordi del vetro di copertura.
Sollevare la parte posteriore della sonda e applicare del cemento sotto il collo della sonda. Resto della sonda sul cemento prima che si indurisca. Spingere delicatamente verso il basso il collo della sonda per posizionarne la superficie allo stesso livello del vetro di copertura e non intralciare l'obiettivo del microscopio durante l'esperimento.
Coprire la parte superiore del collo della sonda con non più di 1,5 millimetri di strato di cemento dentale per ottenere una presa salda sulla sonda. Costruire un pozzo di cemento che presenti una cresta di 1,5 millimetri a uno o due millimetri attorno al vetro di copertura per creare una bacinella per il fluido di immersione per l'imaging a due fotoni. Dopo che il cemento si è indurito, somministrare l'analgesia post-chirurgica e mantenere l'animale al caldo fino alla guarigione avvolgendolo in un tovagliolo di carta e posizionandolo vicino a una lampadina a infrarossi.