Trapianto di progenitori neuronali derivati da cellule staminali in fette corticali umane

Inizia con una coltura aderente di cellule progenitrici neuronali derivate da cellule staminali preparate per la differenziazione in neuroni corticali.

Rimuovere il terreno, quindi aggiungere un enzima per interrompere la matrice extracellulare e staccare le cellule.

Utilizzare un inibitore per neutralizzare l'enzima, quindi aggiungere un terreno fresco.

Trasferire la sospensione in una provetta, centrifugare e scartare il surnatante per isolare le cellule.

Risospendere le cellule in una matrice di membrana basale per facilitare il trapianto nel tessuto cerebrale, quindi caricarle in un tubo capillare freddo.

Prendi una fetta corticale umana su un gruppo transwell contenente un mezzo.

Rimuovere parte del terreno, quindi iniettare goccioline della sospensione cellulare nel tessuto.

Incubare per consentire alla matrice di solidificarsi.

Aggiungere un terreno per immergere il tessuto, quindi incubare per consentire alle cellule progenitrici di differenziarsi in neuroni, estendere i loro neuriti e formare sinapsi con i neuroni corticali ospiti.

La fetta corticale è ora pronta per l'analisi.

Rimuovere il terreno dal pallone per colture cellulari. Il settimo giorno di differenziazione, staccare le