Iniezione stereotassica di virus per la modificazione genetica stabile in un modello murino

Inizia con un topo anestetizzato con un cranio esposto in una cornice stereotassica.

Abbassare il supporto della siringa fino a quando la punta dell'ago non si allinea con il bregma, un punto di riferimento del cranio.

Utilizzando le coordinate stereotassiche predeterminate, localizzare la zona ventricolare-subventricolare o

V-SVZ, una nicchia neurogena contenente principalmente cellule staminali neurali o NSC, e contrassegnare questa regione.

Rimuovere la siringa e praticare con cura un piccolo foro, evitando danni cerebrali.

Riempi una siringa sterile con virus che trasportano il transgene e posiziona l'ago sulla superficie del cervello.

Riposizionare la siringa e abbassarla fino a quando la punta tocca lo strato più interno della superficie cerebrale.

Penetrare nel cervello per raggiungere la V-SVZ, iniettare lentamente il virus, trattenere brevemente e quindi ritirare la siringa.

Nella V-SVZ, il virus entra nelle NSC attraverso la fusione della membrana. Il suo RNA si trascrive inversamente in DNA.

Questo DNA si integra quindi nel genoma delle NSC, consentendo una modificazione genetica stabile delle NSC.

Dopo l'anestesia, un topo di sei-otto settimane si rade l'area tra le orecchie. Suc