JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:30 min • August 29th, 2025
Inizia con un ratto neonatale anestetizzato posizionato su un termoforo con un nervo sciatico esposto.
Sollevare il sito distale del nervo e iniettare una soluzione di DNA plasmidico mescolata con un colorante. Il colorante aiuta a tracciare la consegna dei plasmidi.
Posiziona un elettrodo a pinzetta attorno al nervo, mantenendo un piccolo spazio tra i bracci dell'elettrodo.
Introdurre soluzione salina in questa fessura per la conduzione della corrente.
Applicare un impulso elettrico che circonda le fibre nervose che crea pori transitori della membrana nelle cellule di Schwann. Quindi, invertire le posizioni degli elettrodi e applicare un secondo impulso elettrico. Questo migliora l'ingresso del DNA plasmidico attraverso i pori.
Dopo l'elettroporazione, la membrana cellulare si richiude e intrappola il plasmide.
Pulisci il sito, sigilla l'incisione cutanea, disinfettala e lascia che il ratto si riprenda.
Successivamente, il DNA plasmidico trasloca nel nucleo e si integra nel DNA della cellula di Schwann, consentendo il successo del trasferimento genico.
Tirare delicatamente il lato distale del nervo usando un ago per sollevare il nervo esposto. Inserire la micropipetta di vetro nel sito distale del nervo e iniettare la soluzione di DNA applicando una leggera pressione positiva fino a quando il nervo appare verde. Quindi, posiziona un elettrodo di platino a pinzetta a circa uno o due millimetri dal nervo.
Riempire lo spazio tra l'elettrodo e il nervo con una soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%. Applicare impulsi elettrici al sito di iniezione utilizzando un elettroporizzatore. Dopo il primo set di impulsi, invertire l'elettrodo e applicare un altro set di impulsi.
Successivamente, pulire il sito di elettroporazione con una soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%. Dopo l'elettroporazione, chiudere l'incisione con colla cianoacrilica. Quindi, pulire la ferita con iodio povidone.
Rimuovere la maschera facciale dall'animale e tenerla sullo scaldavivande elettrico per almeno un'ora per consentire il pieno recupero dall'anestesia