Trapianto di cellule progenitrici neurali umane nel cervello di topo

Fissare un topo anestetizzato in un telaio stereotassico.

Applicare un unguento per gli occhi per prevenire l'essiccazione corneale.

Radere il cuoio capelluto e disinfettare la pelle.

Inserire le barre auricolari per stabilizzare il cranio.

Quindi, fai un'incisione sulla linea mediana per esporre il cranio.

Praticare un foro attraverso il teschio alla coordinata target.

Caricare una siringa con cellule progenitrici neurali umane geneticamente modificate o NPC che esprimono luciferasi e una proteina fluorescente per la visualizzazione.

Allineare la siringa con il sito target e abbassare l'ago alla profondità desiderata.

Applicare l'adesivo tissutale attorno all'ago per evitare perdite cellulari.

Iniettare le cellule lentamente per garantire una distribuzione uniforme.

Tenere brevemente l'ago in posizione per evitare il riflusso della sospensione cellulare.

Infine, estrarre lentamente l'ago e chiudere l'incisione.

Il modello murino con NPC trapiantati è ora pronto per la visualizzazione.

Trasportare l'animale dalla camera di induzione al telaio stereotassico, mantenendo l'anestesia utilizzando una maschera facciale.

Applicare lubrificante oftalmico per evitare che gli occhi si secchino. Radere il cuoio capelluto del topo con un rasoio elettrico e disinfettare la pelle con una soluzione di betadine al 5% utilizzando tamponi di cotone. Fissare la testa del mouse e inserire le barre auricolari nel meato esterno.

Praticare un foro con un diametro di due o tre millimetri attraverso il cranio con un trapano dentale chirurgico. Risospendere le cellule preparate nella provetta e aspirare due microlitri di sospensione cellulare in una siringa. Posizionare la siringa sopra il sito target e spostare lentamente l'ago sulla superficie della dura madre e calcolare le coordinate di profondità.