JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:30 min. • August 29th, 2025
Inizia con un topo anestetizzato che esprime un gene marcatore fluorescente e fissato in una cornice stereotassica.
La testa è inclinata verso il basso per facilitare l'accesso alla cisterna magna, al liquido cerebrospinale o allo spazio riempito di liquido cerebrospinale tra il cervelletto e il tronco encefalico.
Applicare un unguento per gli occhi, radere il collo e sterilizzare.
Praticare un'incisione sulla linea mediana per esporre la membrana che copre la cisterna magna.
Ritrarre i tessuti con un separatore per accedere alla cisterna magna.
Prendi una microsiringa riempita con un farmaco induttore e dotata di un ago piegato.
Inserire l'ago e forare la membrana per raggiungere la cisterna magna.
Iniettare lentamente il farmaco per una dispersione uniforme all'interno del liquido cerebrospinale.
Il farmaco entra nelle cellule della superficie cerebrale e innesca l'espressione del gene marcatore, producendo proteine fluorescenti rosse.
Il flusso di liquido cerebrospinale impedisce la diffusione del farmaco nelle regioni cerebrali più profonde.
L'imaging a fluorescenza conferma la marcatura selettiva delle cellule di superficie, dimostrando una somministrazione mirata di farmaci nelle regioni esposte al liquido cerebrospinale.
Anestetizzare l'animale nella camera dell'isoflurano.
Quindi regolare il supporto della testa del mouse in modo che il boccaglio si trovi a un angolo di circa 30 gradi dalla superficie del tavolo chirurgico e fissare la testa dell'animale sul supporto. Per migliorare l'accessibilità alla cisterna magna, posizionare il corpo dell'animale a circa 30 gradi dalla superficie del tavolo con la testa inclinata verso il basso che stabilirà un angolo di 120 gradi con il resto del corpo ed estenderà la parte posteriore del collo per facilitare l'accesso alla cisterna magna. Una volta che l'animale è posizionato correttamente, applicare un unguento oftalmico, radersi la parte posteriore del collo e disinfettare l'area con salviettine imbevute di alcol e Betadine.
Usa le forbici chirurgiche per praticare un'incisione sulla linea mediana che inizia a livello dell'osso occipitale e si estende posteriormente. Separare delicatamente il tessuto connettivo superficiale e i muscoli del collo tirando lateralmente dalla linea mediana con una pinzetta a punta sottile che esporrà la membrana durale sovrastante la cisterna magna. Posizionare un piccolo separatore chirurgico per consentire la visualizzazione della cisterna magna durante tutta la procedura.
Identificare l'estremità caudale dell'osso occipitale e inserire l'ago precedentemente piegato immediatamente sotto. Una volta perforata la dura madre, lasciare che la punta piegata dell'ago penetri sotto la superficie tirando delicatamente la siringa verso l'alto e parallelamente al corpo dell'animale, il che garantirà una migliore stabilità. Iniettare il composto lentamente per evitare interferenze con il flusso naturale del liquido cerebrospinale.
Dopo l'iniezione, lasciare riposare l'ago all'interno per un minuto, quindi rimuoverlo con cura con l'aiuto di una pinza a punta sottile.