Trapianto stereotassico di sospensione di cellule neurali in un topo con lesione cerebrale traumatica

Inizia con una siringa precaricata collegata a una pompa a siringa stereotassica.

La siringa contiene una sospensione di cellule neurali derivate da cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo.

Posizionare l'ago sopra la corteccia cerebrale esposta chirurgicamente di un topo con lesione cerebrale traumatica.

Abbassare la siringa per toccare la dura madre con la punta dell'ago, regolare le coordinate per mirare al sito della lesione e ritrarla leggermente. Ora,

crea una piccola incisione, stabilendo un punto di ingresso per l'ago.

Quindi, abbassare lo stantuffo per consentire il flusso della sospensione della cella.

Abbassa l'ago e penetra nel cervello per raggiungere il confine tra materia grigia e materia bianca della corteccia profonda.

Infine, infondere lentamente la sospensione cellulare mentre si irriga il sito chirurgico con soluzione fisiologica per mantenere l'idratazione.

Al termine, estrarre l'ago, irrigare nuovamente e chiudere l'incisione.

Nel tempo, le cellule trapiantate maturano, ripristinano i circuiti neurali e riparano i danni cerebrali.

Circa 24 ore dopo la craniectomia, riposizionare il topo nel telaio stereotassico.

Copri il topo con il telo chirurgico fenestrato. Lavare il sito dell'incisione con soluzione fisiologica sterile per pulire il sito e allentare le suture. Utilizzare un batuffolo di cotone imbevuto di etanolo al 70% per sterilizzare delicatamente il sito di incisione e utilizzare pinzette sottili e forbici oftalmiche per rimuovere i punti di sutura.

Quindi irrigare il sito dell'intervento chirurgico e della craniectomia con abbondante soluzione fisiologica sterile. In una cappa di biosicurezza per colture cellulari, agitare o picchiettare delicatamente il tubo di cellule per garantire una sospensione cellulare omogenea. Utilizzare una micropipetta per caricare circa 7,5 microlitri di cellule in una siringa Hamilton attraverso l'estremità dello stantuffo.

Tenendo la siringa a un angolo di 120 gradi con l'estremità dello stantuffo rivolta verso il basso, inserire lo stantuffo facendo attenzione a non introdurre una bolla d'aria tra la sospensione e la punta dello stantuffo. Collegare il gruppo guarnizione all'ago della pipetta e collegare l'ago alla siringa. Spingere lo stantuffo per spostare la sospensione cellulare nell'ago della pipetta e collegare la siringa alla pompa a siringa stereotassica.

Far avanzare lo stantuffo per assicurarsi che il gruppo pompa-siringa funzioni correttamente e spostare l'ago nelle coordinate per l'iniezione. Allineare la punta dell'ago alla bregma e impostare le coordinate x e y a zero. Spostare la punta dell'ago sopra la craniectomia a due millimetri lateralmente e meno un millimetro posteriormente alla bregma e toccare la punta dell'ago sulla superficie della dura madre.

Sollevare leggermente l'ago, quindi praticare una piccola incisione nella dura madre nel punto in cui l'ago è entrato in contatto. Impostare la coordinata stereotassica su z uguale a zero e premere lo stantuffo per confermare che la sospensione cellulare scorra adeguatamente prima di introdurre l'ago nel cervello. Introdurre l'ago nel cervello a una profondità di z uguale a meno 1,4 millimetri per posizionare l'innesto al confine tra materia grigia e materia bianca della corteccia profonda.

Avviare la pompa a siringa per infondere la sospensione cellulare per un periodo di 15 minuti. Utilizzare un microscopio a lunga distanza di lavoro per monitorare il deflusso della sospensione cellulare, irrigando il sito chirurgico con soluzione fisiologica sterile durante l'iniezione per mantenere l'idratazione dei tessuti. Quando tutte le cellule sono state consegnate, prelevare lentamente l'ago da trapianto e irrigare il sito chirurgico con ulteriore soluzione salina prima di chiudere l'incisione con nuove suture.

Quindi fornire cure post-operatorie come dimostrato.