Transinfezione batterica in vitro delle cellule T tramite formazione di sinapsi immunologiche

Iniziare con pozzetti contenenti cellule T CD4⁺ che esprimono recettori specifici per il peptide dell'ovoalbumina o OVAp.

Nel pozzetto di controllo negativo, posizionare un inserto di membrana porosa.

In una provetta, prelevare le cellule dendritiche infettate da batteri e caricate con OVAp per la presentazione superficiale.

Aggiungere le cellule dendritiche direttamente nel pozzetto del test e nell'inserto nel pozzetto di controllo negativo.

Aggiungere il terreno ai pozzetti e incubare.

Nel pozzetto del test, le cellule interagiscono per formare una sinapsi immunologica, facilitando il trasferimento batterico dalla cellula dendritica alla cellula T, un processo noto come transinfezione.

Nel pozzetto di controllo negativo, la barriera di membrana impedisce l'interazione cellula-cellula, inibendo così la transinfezione.

Aggiungere l'antibiotico gentamicina ai pozzetti e incubare.

La gentamicina non può penetrare nelle cellule eucariotiche, uccidendo così solo i batteri non internalizzati mentre i batteri internalizzati sopravvivono.

Il campione di prova contenente cellule T infette e il campione di controllo con cellule T non infette sono ora pronti per l'isolamento delle cellule T e la quan