Valutazione dell'attaccamento pneumococcico alle cellule endoteliali umane primarie in costante flusso di terreno

Posizionare un vetrino a canale rivestito di gelatina, collegato a una pompa microfluidica, su un tavolino da microscopio.

Il vetrino contiene cellule endoteliali umane primarie coltivate in terreni di flusso, con stringhe del fattore di von Willebrand o VWF, una glicoproteina, sulla superficie cellulare.

Queste stringhe sono generate stimolando le cellule con istamina.

Il flusso controllato del fluido, applicato attraverso la pompa microfluidica, favorisce la secrezione e lo srotolamento del VWF. In questo modo vengono esposti domini di binding specifici sulle stringhe VWF.

Arrestare il flusso del fluido, aggiungere un anticorpo verde specifico per VWF coniugato con fluoroforo e riprendere il flusso per etichettare le stringhe con l'anticorpo.

Mettere in pausa il flusso del terreno e introdurre batteri pneumococchi fluorescenti rossi che esprimono proteine.

Riavviare il flusso per distribuire i batteri, consentendo l'adesione ai domini esposti attraverso adesine superficiali.

Utilizzando la microscopia a fluorescenza, visualizza in tempo reale il legame batterico alle corde.

Arrestare il flusso del terreno e acquisire immagini Z-stack per quantificare l'adesione batterica alle cellule end