Monitoraggio delle dinamiche dell'infezione batterica in un topo utilizzando la bioluminescenza
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 4:35 min. • September 26th, 2025
Iniziare con una sospensione di un ceppo attenuato di un batterio patogeno.
Il ceppo attenuato mostra una ridotta patogenicità a causa di delezioni mirate nei geni di virulenza.
I batteri sono marcati cromosomicamente con un operone bioluminescente che consente la produzione autonoma di luce.
I batteri esprimono l'operone bioluminescente, producendo un enzima luciferasi e un complesso enzimatico che sintetizza il substrato della luciferasi.
La luciferasi ossida il substrato per produrre luce visibile.
Centrifugare la sospensione ed eliminare il surnatante.
Lavare le cellule con un tampone, centrifugare nuovamente e scartare il surnatante per rimuovere i componenti non cellulari residui.
Risospendere le cellule nel tampone per ottenere una concentrazione batterica ottimale e aspirare la sospensione in una siringa.
Iniettare la sospensione per via intraperitoneale in un topo, quindi trasferirla in una gabbia.
Visualizzare il segnale bioluminescente a intervalli regolari.
Il ceppo attenuato rimane localizzato e la bioluminescenza diminuisce gradualmente, indicando la guarigione dell'infezione.
La mattina delle iniezioni, scongelare i crioviali delle cellule batteriche a quattro gradi Celsius per
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