Valutazione della transcitosi di E. coli attraverso i monostrati epiteliali intestinali

Inizia con una coltura di E. coli isolata da neonati con infezioni del flusso sanguigno.

Centrifugare per pellettare i batteri, scartare il surnatante e risospendere il pellet in un mezzo privo di antibiotici.

Prelevare una piastra con un inserto transwell contenente un monostrato di cellule epiteliali intestinali.

Misurare la resistenza elettrica attraverso lo strato cellulare con una sonda per confermare l'integrità del monostrato.

Aggiungere la sospensione batterica nell'inserto e incubare.

I batteri aderiscono alle cellule epiteliali, vengono internalizzati all'interno delle vescicole e vengono trasportati attraverso le cellule fino al pozzetto inferiore attraverso un processo chiamato transcitosi.

Misurare nuovamente la resistenza elettrica; Un valore stabile conferma la presenza di un monostrato intatto durante la transcitosi.

Trasferire l'inserto in un pozzetto fresco e raccogliere il terreno dal pozzetto inferiore precedente.

Placcare il terreno raccolto su una piastra di agar e incubare per sviluppare le colonie batteriche.

Contare le colonie per determinare l'estensione della transcitosi di E. coli attraverso la barriera epiteliale intestinale.

Ogni 30 minuti dopo l'inoculazione, r