Valutazione dello sciame batterico utilizzando una piastra inibitrice del gradiente

Prendi un piatto a sciame sfumato con agar a doppio strato. Lo strato inferiore, contenente un inibitore, è stato versato per creare un gradiente dell'inibitore.

La piastra contiene pozzetti isometricamente distanziati per fornire uno spazio appropriato per lo sciame batterico o la migrazione collettiva, prevenendo le sovrapposizioni dello sciame.

Inoculare i pozzetti con una coltura batterica e incubare la piastra.

In basse concentrazioni di inibitori, i batteri coordinano il loro movimento flagellare, avviando la migrazione collettiva o la sciamatura.

In presenza di alte concentrazioni di inibitori, l'inibitore sopprime l'espressione dei geni correlati ai flagelli.

Ciò si traduce in un movimento flagellare limitato, che porta a una motilità di sciamatura limitata.

Fotografare la lastra sotto la luce bianca a intervalli regolari per catturare il modello di sciamatura.

Durante l'imaging, regolare il tempo di esposizione per migliorare la luminosità degli sciami.

Modifica le impostazioni di soglia per ridurre al minimo l'interferenza della luce di sfondo e aumentare il contrasto.

Salvare l'immagine per una successiva analisi dell'effetto della concentrazione di inibitori sullo sciame batteri