Saggio del biosensore batterico per la rilevazione del mercurio biodisponibile in condizioni anaerobiche

Iniziare con una configurazione del test contenente le fiale posizionate all'interno di una camera anaerobica.

Ogni fiala contiene terreni integrati con nitrato di sodio, ioni mercurio e concentrazioni variabili di solfato di magnesio.

Ruotare la configurazione per mescolare i componenti, quindi incubare.

Durante l'incubazione, il solfato di magnesio favorisce la formazione di complessi di mercurio non biodisponibili, riducendo gli ioni mercurio liberi e biodisponibili in modo dipendente dalla concentrazione.

Quindi, aggiungi biosensori indotti, batteri geneticamente modificati che trasportano un plasmide e mescola.

Il plasmide contiene un regolatore trascrizionale sensibile al mercurio e un promotore collegato a un gene reporter fluorescente.

In condizioni anaerobiche, i batteri utilizzano il nitrato per la respirazione.

Gli ioni mercurio liberi entrano nelle cellule, legano il regolatore trascrizionale e attivano il gene fluorescente, producendo proteine fluorescenti.

Trasferire le aliquote da ogni fiala in una piastra a più pozzetti.

Utilizzando un lettore di piastre, misurare l'intensità della fluorescenza.

Una diminuzione della fluorescenza con l'aumentare delle concentrazioni di solfat