Microscopia microfluidica time-lapse per studiare la persistenza degli antibiotici nei batteri

Inizia con cellule batteriche in crescita esponenziale che esprimono una proteina di fusione legante il DNA marcata in fluorescenza per visualizzare il nucleoide.

Aggiungere le cellule agli ingressi cellulari di una piastra microfluidica pre-preparata.

Quindi, introdurre i terreni contenenti antibiotici e i terreni privi di antibiotici in ingressi di soluzione separati.

Sigillare la piastra, montarla sul tavolino del microscopio e avviare l'imaging time-lapse.

Per prima cosa, caricare le cellule nella camera di coltura.

Quindi, perfondere terreni privi di antibiotici nella camera per supportare la crescita cellulare esponenziale.

Infine, introdurre i terreni contenenti antibiotici.

L'antibiotico induce rotture del DNA a doppio filamento, uccidendo le cellule sensibili. Queste cellule presentano nucleoidi compattati e non replicanti con fluorescenza stabile.

Torna ai terreni privi di antibiotici per favorire il recupero.

Le cellule persister, una piccola sottopopolazione che sopravvive al trattamento antibiotico, riprendono la replicazione del DNA, si allungano e si dividono.

Questo recupero porta a un aumento della fluorescenza nelle cellule persistenti, consentendo loro di essere distinte v