Imaging in tempo reale dell'infezione batterica in un modello murino utilizzando la bioluminescenza

Prendiamo un topo anestetizzato pre-infettato da un ceppo batterico patogeno progettato per esprimere un operone bioluminescente geneticamente integrato.

L'operone codifica la luciferasi e un complesso multienzimatico che sintetizza il suo substrato.

L'enzima luciferasi catalizza una reazione con questi substrati, generando luminescenza visibile.

Posizionare il topo in posizione supina sulla piattaforma stabilizzata a temperatura di una camera di imaging e mantenere l'anestesia durante l'imaging.

Utilizzare il sistema di imaging per catturare sia immagini bioluminescenti che quelle a raggi X corrispondenti del topo.

L'immagine bioluminescente rivela l'entità dell'infezione batterica, mentre l'immagine a raggi X fornisce un riferimento anatomico per la localizzazione dell'infezione.

Dopo l'imaging, riporta il topo nella gabbia e permette il recupero.

Cattura immagini di bioluminescenza a intervalli regolari per monitorare la progressione in tempo reale dell'infezione batterica.

Col tempo, la presenza di segnali bioluminescenti in vari punti conferma la diffusione dell'infezione in tutto l'ospite.

Per fotografare gli animali, prepara il sistema di imaging impostando i parametri della telecamera e riscaldando il palco. Imposta il flusso di ossigeno a 1,5 litri al minuto e l'isoflurano al 3,5% e sposta il topo nella camera anestetica, poi nella fase stabilizzata a temperatura, dopo l'anestesia. Posizionare il topo sulla schiena con le braccia tese e inserire un cono nasale per la somministrazione di isoflurano al 2,5% durante l'imaging di studio.

Chiudi la porta e scatta immagini bioluminescenti e raggi X del topo. Quando l'imaging è terminato, riporta il topo nella sua gabbia e monitoralo. Dovrebbe riprendere conoscenza entro 3-5 minuti.