JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:52 min. • March 31st, 2026
Inizia con un topo anestetizzato con la schiena scoperta, posizionato su un coperchio per piastra di Petri.
Il topo ha una ferita da ustione infettata da batteri bioluminescenti e resistenti ai farmaci.
Copri gli occhi del mouse con carta stagnola per evitare un'esposizione eccessiva alla luce blu.
Metti il mouse sotto un dispositivo LED blu a una distanza fissa.
Irradia la ferita a un'intensità costante. Aumenta il tempo di esposizione per somministrare dosi più alte.
La luce penetra nel tessuto della ferita e raggiunge i batteri colonizzatrici.
All'interno di questi batteri, molecole fotosensibili assorbono la luce blu e si fotoattivano, produendo specie reattive dell'ossigeno (ROS).
Gli ROS danneggiano i componenti batterici, incluse le proteine bioluminescenti, causando la morte cellulare batterica con danni minimi ai tessuti circostanti.
Dopo ogni esposizione, esegui immagini bioluminescenze per monitorare la vitalità batterica intorno alla ferita.
Man mano che la dose aumenta, il segnale diminuisce di conseguenza.
Questo declino indica l'effetto antibatterico dello stress ossidativo indotto dalla luce blu.
Dopo l'anestetizzazione dei topi, secondo il protocollo testuale, si dividono casualmente gli animali in un gruppo antimicrobico con luce blu o trattato con aBL e un gruppo di controllo non trattato. Per il gruppo trattato con aBL, si usa la carta stagnola per coprire gli occhi dei topi e evitare una sovraesposizione alla luce. Posiziona le bruciature del topo direttamente sotto il LED con un coperchio di una piastra di Petri da 35 millimetri sotto l'addome del topo per mantenere la schiena in posizione orizzontale.
Successivamente, sostituisci il misuratore di energia con un mouse su una piastra di Petri quadrata. Poi riaggiusta l'altezza del mouse in una posizione in cui la distanza tra l'apertura del LED e la superficie della combustione del mouse sia uguale alla distanza tra l'apertura del LED e il sensore luminoso del misuratore di energia. Irradiare le ustioni infette a un'irradianza di 100 milliwatt per centimetro quadrato.
Somministrare aBL in aliquote di 72 joule per centimetro quadrato fino a raggiungere la dose totale di 360 joule per centimetro quadrato. Dopo ogni dose di luce, esegui immagini bioluminescente delle ustioni del topo, come dimostrato in precedenza in questo video. Per il gruppo di controllo non trattato, eseguire immagini bioluminescenti delle ustioni del topo utilizzando gli stessi intervalli di tempo utilizzati per il gruppo trattato con aBL.