Imaging a fluorescenza della colonizzazione batterica nel tessuto renale del topo
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:43 min. • March 31st, 2026
Si inizia con un rene di topo infettato da batteri Gram-positivi modificati che colonizzano il tessuto e formano lesioni.
Tutte le cellule batteriche esprimono fluorescenza rossa, mentre condizioni specifiche dell'ospite permettono l'espressione di proteine fluorescenti verdi in cellule specifiche.
Trattare il rene con un fissativo e incubare al buio per preservare la struttura tissutale e parzialmente permeabilizzare le membrane cellulari.
Infondere l'organo in un mezzo adatto, congelarlo e sezionarlo in sottili fette di tessuto.
Posiziona la fetta su un vetrino di vetro carico per l'adesione.
Tingi il tessuto con un colorante nucleare.
Il colorante penetra nelle cellule ospiti e batteriche e si lega al DNA.
Posizionare un copertore sul tessuto e osservare il vetrino al microscopio a fluorescenza utilizzando canali di imaging specifici.
La colorazione nucleare delinea il DNA ospite e quello batterico.
Tutti i batteri presenti nel tessuto esprimono fluorescenza rossa, mentre l'espressione di fluorescenza verde indica il sito di interazione ospite-patogeno.
Al punto di riferimento sperimentale appropriato, si prelevano rene, cuore, fegato, polmoni e milza in tubi di polipropilene da 15 millil
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