Test sulla resistenza all'etanolo per valutare l'integrità della matrice del biofilm

Prendiamo biofilm patogeni derivati da batteri coltivati su agar nutritivo.

Il biofilm non trattato presenta batteri densamente impacchettati all'interno di una matrice extracellulare protettiva.

Il biofilm trattato con inibitore presenta cellule vagamente associate all'interno di una matrice rada.

Dividi in due ogni biofilm, poi esponi una metà al tampone come controllo e l'altra all'etanolo per imporre lo stress antimicrobico.

Nel biofilm non trattato ed esposto all'etanolo, la matrice densa riduce la diffusione dell'etanolo e limita la penetrazione cellulare, con conseguente minore uccisione batterica.

Nel biofilm esposto all'etanolo trattato con inibitori, la matrice rada permette all'etanolo di penetrare più facilmente, portando a una maggiore uccisione batterica.

Centrifuga i tubi e rimuovi il soprantantante. Aggiungi buffer e sonica per disperdere le cellule.

Placca le sospensioni diluite e incuba per permettere la crescita di batteri vitali.

Contare le unità formative di colonie (CFU); meno CFU provenienti dal biofilm esposto all'etanolo e trattato con inibitori confermano che l'integrità della matrice è essenziale per la resistenza all'etanolo.

Prendi una lametta pulita e taglia le