Imaging confocale ad alta risoluzione degli emociti di Drosophila infettati da patogeni

Posizionare una vetrina contenente emociti fissi sul palco del microscopio confocale.

Questi emociti sono ottenuti dalle larve di Drosophila melanogaster e sono stati infettati da un patogeno batterico.

Gli emociti sono marcati con proteine fluorescenti verdi, i loro nuclei sono colorati con un colorante blu e i batteri esprimono proteine fluorescenti rosse per la visualizzazione.

Configura il microscopio per rilevare tutti e tre i fluorofori per monitorare contemporaneamente i compartimenti cellulari e i patogeni.

Utilizzando un obiettivo ad alta risoluzione, concentrarsi sull'emocita bersaglio per catturare dettagli subcellulari.

Regolare la potenza del laser e i guadagni del rilevatore per ottenere un'esposizione adeguata del campione e ottimizzare la nitidezza del segnale.

Scansiona più Z-plane per assicurarti che il livello di esposizione sia appropriato.

Imposta le posizioni Z superiore e inferiore per visualizzare l'intero emocito.

Usa lo zoom di scansione per isolare l'emocita di interesse e acquisire un'immagine 3D ad alta risoluzione.

Questo metodo consente la visualizzazione della localizzazione del patogeno all'interno dell'emocito.

Configura il microscopio confocale per immagini a tre colori di DAPI, EGFP e mCherry.

Posizionare il campione sul microscopio e mettere a fuoco il campione utilizzando un obiettivo a apertura numerica 63X/1.4. Individua gli emociti desiderati nel campo visivo per l'immagini. Successivamente, regolare la potenza del laser e i guadagni del rilevatore per ottenere l'esposizione appropriata del campione.

Controlla più piani Z per assicurarti che il livello di esposizione sia adeguato per l'intero spessore del campione. Successivamente, trova la posizione superiore e inferiore sull'asse Z di un intero emocito. Imposta queste posizioni come iniziale e fine per la sezione Z.

Usa lo zoom di scansione per visualizzare l'area che contiene l'emocito. Raccogliere la serie di immagini alla risoluzione appropriata, ad esempio 1024 per 1024 pixel nel piano X-Y e a distanza di 0,3 micrometri nella dimensione Z.