Name: יישום של שרף אור נרפא, דבק שיניים אלקטרודות הרכבה או בדיקות Microdialysis בניסויים כרונית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 30 s
Description: חקור שימוש חדשני בשרף אור נרפא לדבקת אלקטרודות ומיקרודיאליזה ישירות לגולגולת בניסויים כרוניים. שיטה זו מבטלת את הצורך בברגי עיגון ומפחיתה דלקת רקמות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו מודים עמיתינו ב-BSI RIKEN עבור תומך חביב שלהם עצות פורה במהלך עבודה זו. ברצוני להביע הערכה כנה שלי פרופ Shigemi מורי, פרופסור G בור Juh SZ, בני הזוג. Kiyoji Matsuyama, קתלין AK kesi ו RP ד Dobolyi אשר יעץ לי ללמוד שיטה microdialysis במהלך לתואר שני באוניברסיטת בוגר ללימודים מתקדמים, יפן. לבסוף, אנו מודים למר כריס Sarnecky וד&quot;ר Akitsugu Takasu עבור תומך שלהם הקלטת וידאו.

שלב 1. הכנת ההשתלה בדיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה (לא רואים בסרט) הרדימי כל ציפור עם זריקה interperitoneal של קטמין (12.5 מ&quot;ג / ק&quot;ג משקל גוף) ו xylazine (25 מ&quot;ג / ק&quot;ג) תערובת לייצר על רמה קבועה של הרדמה כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן ראש למסגרת stereotaxic השתמש Xylocaine (TM) ג&#39;לי להפחית כאבים מקומיים של לחץ ברים &quot;האוזן. ראש של ציפור קבוע במנגנון stereotaxic המורכב ברים האוזן בעל מקור שמכיל את הראש בזווית של ° 45. במהלך הניתוח stereotaxic להשתלה, לחמם את הגוף של הציפור על ידי כרית כירורגית עם שליטה תרמית (חום = 34 ~ 36 ° C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את אזור הניתוח לחטא את שדה הניתוח עם isodine (TM) לפני הניתוח. </li></ol> שלב 2. Stereotaxic מיצוב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקודת התייחסות יישור יישר בדיקה דמה (זכוכית micropipette) על למבדה (Y נקודה) ו-Y סימן נקודה עם פיפטה צבע מלא. נותרת dextran-TMR המחקר נותב האחרון שימש הווידאו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך של העור הסר את העור ולחשוף את פני השטח של הגולגולת. לאחר מכן, לנקות את פני השטח של הגולגולת עם צמר גפן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המיקום של צינורית דמה (בכיוון אופקי) הזזת צינורית דמה לאתר היעד (AP ציר הרוחב ותיאום) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Craniotomy קטן חתך של מאטר הדורה. השתמש מלקחיים בסדר craniotomy ומחט הזרקת קנס (30 G) עבור חתכים של מאטר הדורה. לאחר מכן, לנקות את פני השטח של הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המיקום הסופי (ההשתלה) של צינורית דמה אתר את קצה של צינורית מדריך ב 0.30 מ&quot;מ מעל microdialysis בדיקה, נועד אזור היעד. לבסוף, לנקות את פני השטח של הגולגולת שוב, כי משטח נקי ויבש נדרש מליטה קשה. </li></ol> שלב 3. Pretreatment של פני הגולגולת (הליך דומה &quot;שיקום מילוי ישיר&quot; של המוצר שיניים יועסק). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פריימר טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים PRIMAR נוזלי עם B על צלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל את התערובת על פני השטח של הגולגולת עם מברשת קטנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו למשך 30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יבש עם זרם אוויר עדין. (לא לשטוף). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יישום של סוכן מליטה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל הסוכן מליטה על פני הגולגולת עם מברשת קטנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל זרם אוויר עדין. (לא לשטוף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אור תרופה למשך 20 שניות. </li></ol></li></ol> שלב 4. הרכבה שרף מרוכב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר שרף עם plugger רגיל אם plugger רגיל אינו זמין, מרית מיקרו יכול לשמש במקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אור ריפוי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצטבר הרכבה מצטבר הרכבה מומלץ להבטיח תגובה מלאה של שרף. עבור הרכבה מצטבר, להחיל סוכן מליטה לפני כל הרכבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עובש שרף מרוכבים אור ריפוי עבור התקשות סופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סוף הניתוח </li></ol> נקו את אזור הניתוח, חל אנטיביוטי (משחה גנטמיצין), ולהסיר את החיה מהאש stereotaxic. לאחר מכן, לשמור על בעלי החיים בתא תרמו שבשליטת (טמפרטורת = 33-35 ° C) להתאוששות לאחר הרדמה. כפי שניתן לראות בסרטון, התנהגות לא נורמלית נצפתה כל החיות למחרת לאחר הניתוח.

<ol><li>Adell, A., Artigas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Brain+microdialysis%3A+Principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22%5BJournal%5D)">In vivo Brain microdialysis: Principles and applications.</a> In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKendrick%2C+K+%22Microdialysis+in+the+Neuroscience%22">Microdialysis in the Neuroscience</a>. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).</li>
<li>Oakley, B., Schafer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOakley%2C+B+%22Experimental+Neurobiology%3A+A+laboratory+Manual%22">Experimental Neurobiology: A laboratory Manual</a>. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).</li>
<li>Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+sensori-motor+nucleus+NIf+in+generation+of+complex+syntactical+song+in+the+Bengalese+Finch+I.+A+Biological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Soc.+Neurosci+Abst%22%5BJournal%5D)">Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study.</a> Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).</li>
<li>Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoulton%2C+A+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22">In Vivo Neuromethods: Neuromethods</a>. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).</li>
</ol>

הניסויים נערכו בהתאם הנחיות לניסויים בבעלי חיים של המוח המדע במכון, RIKEN (RIKEN-BSI) ובעלי חיים המכון של ועדת האתיקה אישרה אותם.

בהשוואה יישום קונבנציונאלי שרפים עצמי ריפוי אקריליק, הציג את הטכניקה יש מספר יתרונות חשובים: 1. ישיר מליטה: אקריליק ריפוי עצמי יכול להיות מצורף העצם למשך זמן מה אבל זה לא לדבוק העצם. לכן, ברגים מעגן נדרשים לתקן את בסיס הרכבה (ראה איור 2 א). לעומת זאת, שרף בריפוי האור יכול האג&quot;ח לעצם ישירות כך הברגים אינם נדרשים (תרשים 2B). לכן, הגודל של בסיס הרכבה ניתן להפחית במידה ניכרת. בנוסף, שרפים ריפוי אור גם שומרת על כמה מתכות, אם השתמשת &quot;פר...

1A צילום מראה בדיקה microdialysis (א), אגוז כובע (ב) ו צינורית מדריך (ג). בתמונה זו, קנית את המדריך מוקף שרף שיניים הדוגלת הגולגולת ישירות. תמונה ב &#39;מראה ציפור במהלך זלוף סמים. בחלק העליון של הראש, יש בדיקה microdialysis שמחובר לצינור תפרון בסדר. ברים סולם = 1 ס&quot;מ ו 2 ס&quot;מ עבור B, בהתאמה. <img src="http://www.jove.com/files/249_2008_8_26_3/249_Figure-01.png" /> איור 1 - תצלומים של בדיקה microdialysis (א) ו ציפור במהלך זלוף סמים (ב)

יישום של שרף אור נרפא, דבק שיניים אלקטרודות הרכבה או בדיקות microdialysis בניסויים כרונית

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

בניסויים הקלטה כרונית, ריפוי עצמי שרף אקרילי שיניים שימשו בסיס הרכבה של אלקטרודות או microdialysis-בדיקות. מאז אקריליק אלה אינם האג&quot;ח עד העצם, ברגים שימשו עוגנים. עם זאת, בחיות מעבדה קטנות כמו פינקים או עכבר, הגולגלות שלהם הם שבירים מאוד לא מצליח להחזיק את העוגנים. בדו&quot;ח זה, אנו מציעים יישום חדש של אור ריפוי שיניים שרפים על בסיס הרכבה של אלקטרודות או בדיקות microdialysis בניסויים כרונית. חומר זה מאפשר התקשרות ישירה הגולגולת. לכן, ברגים עוגן לא נדרשים בתחום כירורגית ניתן להפחית במידה ניכרת. ניסיון העבר מראה כי ההשפעה מליטה שומרת יותר מ 2 חודשים. חלון של שרף קונבנציונלי של זמן כאשר החומרים הם וגמיש ו עביד הוא כמה דקות. עם זאת, חלון של זמן עבודה עבור אלה הדבקים שיניים משמעותית רחבה מתכווננת.

בדו&quot;ח זה, אנו מציעים יישום חדש של אור ריפוי שיניים שרפים על בסיס הרכבה של אלקטרודות או בדיקות microdialysis בניסויים כרונית. חומר זה מאפשר התקשרות ישירה הגולגולת.

יישום של שרף אור נרפא, דבק שיניים אלקטרודות הרכבה או בדיקות Microdialysis בניסויים כרונית

בניסויי הקלטה כרוניים, נעשה שימוש בשרפים אקריליים דנטליים בעלי פולימריזציה עצמית כבסיס לעיגון של אלקטרודות או גשמי מיקרודיאליזה. מאחר ש...

בניסויי אלקטרופיזיולוגיה או מיקרודיאליזה כרוניים, נעשה שימוש נרחב בשרף דנטלי בעל פולימריזציה עצמית כבסיס לקיבוע של אלקטרודה או גשש מיקרודיאליזה. מכיוון שחומרי אקריליים אלו אינם נשפעים למשטח העצם, נעשה שימוש בברגים כעגנים. עם זאת, בניסויים קטנים, בבעלי חיים כמו עכברים או חולדות, הגולגולת שבירה מאוד ואינה יכולה להחזיק עגנים באופן יעיל.לעיתים ברגים אלו בקרסול גורמים לזיהום ולדלקת ברקמות. בדיווח זה, אנו מציעים יישום חדש של שרף דנטלי שאינו דורש פילמור (light-curing dental resin) כבסיס הרכבה. חומר זה מאפשר קישור ישיר לגולגולת.לפיכך, אין צורך בברגי עיגון וניתן לצמצם את שטח השטח הכירורגי באופן משמעותי. המשקל הכולל של גשושית, קנולה מדריכה, קבינט ובסיס הרכבה היה פחות מגרם אחד. ניסיונות קודמים מראים כי השפעת ההדבקה נשמרת למשך יותר מחודשיים.ניתן להשתמש בטכניקה זו גם עבור חיות ניסוי אחרות, כגון עכברים, דגים וכדומה. שני ביצועים בשני סרגים הוקלטו בווידאו. בהדגמה זו, נבחרו והושתמשו בצילומים הטובים ביותר מכל שלב בפרוטוקול.אלו הן תאורי השחזור הסטריאוטקסיים והבקרים של תא ההחלמה. אלו הם מאה מכשירים לניתוח. Prime PR משמאל ומיקרו-בעיה.האביזרים שלה מימין. אם תוכנית ה priming אינה זמינה, ניתן להשתמש במקום זאת במקלול מיקרו (micro spatula). זהו סט להקשיה של שרף דנטלי מימין.פריימר AP וחומר קישור נשמרו בבקבוק

application-light-cured-dental-adhesive-resin-for-mounting-electrodes

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הסרטון מדגים הליך להשתלת יחידת אלקטרודה רב-ערוצית דו-ערוצית אלחוטית במוח חולדה כדי להקליט ולעורר רשתות עצביות רב-ערוציות.

השתלת מערכת מיקרואלקטרודות דו-כיוונית אלחוטית במוח של חולדה

טכניקות קיבוע ראש מסורתיות השתמשו במסגרות מתכתיות המחוברות על הגולגולת כממשק למנגנון קיבוע ראש. פרוטוקול זה מדגים טכניקת קיבוע ראש מבוססת שרף אקרילי ללא מסגרת למשימות התנהגותיות במכרסמים.

טכניקת קיבוע אקריליק שרף דפוס מבוסס ראש במכרסמים

לצבוע ratiometric רגיש pH משמש בשילוב עם מיקרוסקופ סריקת לייזר confocal וניתוח תמונה דיגיטלית לפקח pH תאיים biofilms שיניים בזמן אמת.

הדמית ratiometric של pH התאי Biofilms השיניים

אנו מציגים שיטות לבניית אלקטרודות לרישום בו זמנית של פעילות עצבית חוץ-תאית ולשחרור חומרים נוירואקטיביים מרובים בקרבת אתרי ההקלטה בעכברים ערים. טכניקה זו מאפשרת ניתוח מפורט של קלטים סינפטיים מקומיים משוערים לנוירון המעניין.

הקלטה תאית של העצבית פעילות משולבת עם Microiontophoretic יישום של חומרי Neuroactive עכברי Awake

מיקרואלקטרודות חדות מאפשרות אפיון אלקטרופיזיולוגי מדויק של תפוקת קולטני האור והאינטרנוירונים החזותיים בדרוזופילה חיה. כאן אנו מראים כיצד להשתמש בשיטה זו כדי להקליט תגובות מתח באיכות גבוהה של תאים בודדים לגירוי אור מבוקר. שיטה זו אידיאלית לחקר עיבוד מידע עצבי בעיניים של תרכובות חרקים.

שיטת אלקטרו עבור תגובות מתח תאיים הקלטה של<em&gt; תסיסנית</em&gt; קולטני אור ו interneurons יאירו גירויים<em&gt; In vivo</em

כאן, אנו מתארים שיטה ויוו microdialysis לניתוח שחרור אספרטט ולא גלוטמט בהיפוקמפוס הגחון של חולדות אפילפסיה ואפילפטי, בשילוב עם הקלטות EEG. חוץ-תאית ריכוזי אספרטט גלוטמט יכול להיות בקורלציה עם השלבים השונים של המחלה.

Microdialysis של חומצות אמינו מעוררות במהלך ההקלטות EEG בחופשיות העברת חולדות

התכווצות המלט הדנטלי במהלך הריפוי מחליפה את לוחית הבסיס. פרוטוקול זה ממזער את הבעיה על ידי יצירת בסיס ראשוני של המלט הדנטלי שמשאיר מקום למלט את לוח הבסיס. שבועות לאחר מכן, ניתן לקבע את לוח הבסיס במקומו על פיגום זה באמצעות מלט חדש קטן, ובכך להפחית את התכווצותו.

שימוש בציפוי בסיס ובמיניסקופ מעוגן מראש עם עדשה אובייקטיבית למחקר חולף בסידן בעכברים

פרוטוקול זה מתאר הליך לבניית מערכי מיקרו-ectrode סיבי פחמן להקלטות אלקטרופיזיולוגיות כרוניות וחריפות ב- vivo בעכבר(שרירים)וחמוס(Mustela putorius furo) מאזורי מוח מרובים. כל שלב, לאחר רכישת סיבי פחמן גולמיים להשתלת מערך microelectrode, מתואר בפירוט, בדגש על בניית מערך microelectrode.

הקמה ויישום של מערכי מיקרו-ectrode סיבי פחמן להקלטות כרוניות וחריפות ב-Vivo

כאן, אנו מציגים מערכת שתלי בדיקה קלת משקל וחסכונית לאלקטרופיזיולוגיה כרונית במכרסמים המותאמת לקלות שימוש, שחזור בדיקה, רב-תכליתיות ניסיונית ותאימות להתנהגות.

שתל DREAM: מערכת שתלים קלה, מודולרית וחסכונית לאלקטרופיזיולוגיה כרונית בעכברים מקובעים ראש ומתנהגים בחופשיות

פיתחנו גישה פשוטה וחסכונית לייצור אלקטרודות וערכנו הקלטות של אותות באזורים מרובים בעכברים הנעים בחופשיות. שימוש באופטוגנטיקה, לצד אלקטרופיזיולוגיה רב-אזורית ורישום אותות סידן, איפשר גילוי של פעילויות עצביות באזורים שונים במודל הצתת ההתקפים.

שיטה משולבת ליצירת אופטרודים אלקטרופיזיולוגיים גמישים ונוחים להקלטה רב-אזורית in vivo

פרוטוקול זה מתאר שיטה כירורגית דו-שלבית ליצירת חלון גולגולתי גדול, ניתן לסגירה מחדש, ששומר על הדורה בעכברים. טכניקה זו מאפשרת הקלטות אלקטרופיזיולוגיות כרוניות ורב-מודליות מרשתות מוח עמוקות מפוזרות, כגון רשת מצב ברירת המחדל, במשך מספר שבועות.

פרוטוקול ניתוחי לחלון גולגולתי גדול וניתן לסגירה מחדש המאפשר הקלטות אלקטרופיזיולוגיות לאורך זמן ורב-מודליות של רשת מצב ברירת מחדל של העכבר

חקור שימוש חדשני בשרף אור נרפא לדבקת אלקטרודות ומיקרודיאליזה ישירות לגולגולת בניסויים כרוניים. שיטה זו מבטלת את הצורך בברגי עיגון ומפחיתה דלקת רקמות.

יישום של שרף אור נרפא, דבק שיניים אלקטרודות הרכבה או בדיקות Microdialysis בניסויים כרונית

גלה סרטונים נוספים