Name: Aplicación de curado con luz Resina Adhesivo Dental para los electrodos de montaje o sondas de microdiálisis en experimentos crónica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 30 s
Description: Aprende a aplicar resina dental fotocurable para montar electrodos o sondas de microdiálisis en experimentos crónicos. Este método permite el pegado directo al cráneo sin tornillos, reduciendo inflamación y mejorando la estabilidad en neurociencia.

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Agradecemos a nuestros colegas en RIKEN-BSI por su amable apoyo y consejos durante este fructífero trabajo. Me gustaría expresar mi sincero agradecimiento al profesor Shigemi Mori, profesor G frontera Juh Qué, los Dres. Kiyoji Matsuyama, Katalin AK Kesi y rp d Dobolyi que me aconsejó que método de estudio de microdiálisis en el curso de postgrado en la Universidad de Postgrado para Estudios Avanzados, Japón. Finalmente, agradecemos al Sr. Chris Sarnecky y el Dr. Akitsugu Takasu por su apoyo en la grabación de vídeo.

Paso 1. Preparación de la implantación de la sonda <ol><li> Anestesia (no se muestra en el video) Anestesiar a cada ave con una inyección intraperitoneal de ketamina (12,5 mg / kg de peso corporal) y xilazina (25 mg / kg) de la mezcla para producir un nivel constante de anestesia quirúrgica. </li><li> Fijar la cabeza a un marco estereotáxico El uso de xilocaína (TM) jalea para reducir los dolores locales de bares de presión del oído &quot;. La cabeza de pájaro se fija en un aparato estereotáxico que consiste en bares y oído el titular de pico que tiene la cabeza en un ángulo de 45 °. Durante la cirugía estereotáxica para la implantación, calentar el cuerpo del ave por plataforma quirúrgica con control térmico (temperatura = 34 ~ 36 ° C). </li><li> Desinfectar el área quirúrgica Desinfectar el campo quirúrgico con Isodine (TM) antes de la cirugía. </li></ol> Paso 2. Posicionamiento estereotáxico <ol><li> Referencia punto de alineación Alinear la sonda ficticia (vidrio micropipeta) a la Lambda (Y punto) y la marca Y-punto con la pipeta llena de tinte. Restantes Dextran-TMR del estudio de seguimiento última se utilizó en el video. </li><li> Incisión de la piel Quite la piel y exponer la superficie del cráneo. Luego, limpie la superficie del cráneo con hisopos de algodón. </li><li> Colocación de la cánula dummy (en sentido horizontal) Mover la cánula maniquí al sitio de destino (AP eje y la coordinación lateral) </li><li> Craneotomía pequeña y la incisión de la duramadre. Use unas pinzas finas para craneotomía y una fina aguja de inyección (30 G) para las incisiones de la duramadre. Luego, limpie la superficie del cráneo. </li><li> Posicionamiento final (implantación) de la cánula maniquí Localizar la punta de la cánula guía en el 0,30 mm por encima de la sonda de microdiálisis intencionados región de destino. Por último, limpiar la superficie del cráneo, de nuevo, porque una superficie limpia y seca se requiere para la unión dura. </li></ol> Paso 3. El tratamiento previo de la superficie craneal (El procedimiento similar para la &quot;restauración de obturación directa&quot; del producto dental se emplea). <ol><li> Primer tratamiento <ol><li> Mix PRIMAR A con B líquido en un plato. </li><li> Aplique la mezcla en la superficie del cráneo con un pequeño cepillo. </li><li> Dejar durante 30 segundos. </li><li> Seca con corriente de aire templado. (No se lave.) </li></ol></li><li> Aplicación de agente de unión <ol><li> Aplicar el adhesivo sobre la superficie del cráneo con un pequeño cepillo. </li><li> Aplicar una corriente suave de aire. (No se lave.) </li><li> Fotocurado durante 20 segundos. </li></ol></li></ol> Paso 4. Montaje de resina compuesta <ol><li> Montaje de resina con condensador plano Si un condensador normal no está disponible, una espátula de micro-se puede utilizar en su lugar. </li><li> Fotopolimerización </li><li> Incremental de montaje Incremental de montaje se recomienda para asegurar la reacción completa de la resina. Para el montaje incremental, aplique adhesivo antes de cada montaje. </li><li> Molde de la resina compuesta y la luz de curado de endurecimiento final. </li><li> Final de la cirugía </li></ol> Limpie el área quirúrgica, se aplican los antibióticos (pomada de gentamicina), y retire el animal de la llama estereotáxica. Entonces, mantener al animal en una cámara de termo-control (temperatura = 33-35 ° C) para la recuperación postanestésica. Como se muestra en el video, no se observó un comportamiento anormal en cualquiera de los animales al día siguiente después de la cirugía.

<ol><li>Adell, A., Artigas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Brain+microdialysis%3A+Principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22%5BJournal%5D)">In vivo Brain microdialysis: Principles and applications.</a> In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKendrick%2C+K+%22Microdialysis+in+the+Neuroscience%22">Microdialysis in the Neuroscience</a>. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).</li>
<li>Oakley, B., Schafer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOakley%2C+B+%22Experimental+Neurobiology%3A+A+laboratory+Manual%22">Experimental Neurobiology: A laboratory Manual</a>. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).</li>
<li>Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+sensori-motor+nucleus+NIf+in+generation+of+complex+syntactical+song+in+the+Bengalese+Finch+I.+A+Biological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Soc.+Neurosci+Abst%22%5BJournal%5D)">Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study.</a> Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).</li>
<li>Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoulton%2C+A+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22">In Vivo Neuromethods: Neuromethods</a>. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).</li>
</ol>

Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices para la experimentación con animales del cerebro instituto de ciencias, RIKEN (RIKEN-BSI) y de los animales del instituto del comité de ética aprobado.

En comparación con la aplicación de resinas acrílicas convencionales auto curación, la técnica introducida tiene varias ventajas importantes: 1. Contacto directo: Acrílico autocurado se inserta en el hueso por un tiempo pero no se adhiere a los huesos. Por lo tanto, los tornillos de anclaje están obligados a fijar una base de montaje (ver Figura 2a). Por el contrario, la resina de fotopolimerización pueden unirse al hueso directamente, de forma que los tornillos no son necesarios (Figura 2B). Por lo tanto, el tamaño de...

1A fotografía muestra a la sonda de microdiálisis (a), una tuerca (b) y una cánula guía (c). En esta foto, la cánula guía se encuentra rodeado por una resina dental que se adhiere al cráneo directamente. Foto B muestra un pájaro durante la perfusión de drogas. En la parte superior de la cabeza, hay una sonda de microdiálisis que está conectado a un tubo de Tefron bien. Las barras de escala = 1 cm de A y 2 cm de B, respectivamente. <img src="http://www.jove.com/files/249_2008_8_26_3/249_Figure-01.png" /> Figura 1 - Las fotografías de una sonda de microdiálisis (A) y un pájaro durante la perfusión de drogas (B)

aplicación de curado con luz resina adhesivo dental para los electrodos de montaje o sondas de microdiálisis en experimentos crónica

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

En los experimentos de grabación crónica, auto-curado de resinas de acrílico dental se han utilizado como una base de montaje de los electrodos o sondas de microdiálisis. Dado que estos acrílicos no se unen a los huesos, tornillos han sido utilizados como anclajes. Sin embargo, en los pequeños animales de experimentación, como los pinzones o el ratón, sus cráneos son muy frágiles y no se puede sostener con éxito los anclajes. En este informe, proponemos una nueva aplicación de la luz de curado de resinas dentales base de montaje de los electrodos o sondas de microdiálisis en experimentos crónicos. Este material permite contacto directo con el cráneo. Por lo tanto, los tornillos de anclaje no son necesarias y campo quirúrgico se reduce considerablemente. Las experiencias pasadas muestran que el efecto de la vinculación mantiene más de 2 meses. Ventana de resina convencional de tiempo en que los materiales son flexibles y viables, a pocos minutos. Sin embargo, la ventana de tiempo de trabajo de estos adhesivos dentales es mucho más amplio y ajustable.

En este informe, proponemos una nueva aplicación de la luz de curado de resinas dentales base de montaje de los electrodos o sondas de microdiálisis en experimentos crónicos. Este material permite contacto directo con el cráneo.

Aplicación de curado con luz Resina Adhesivo Dental para los electrodos de montaje o sondas de microdiálisis en experimentos crónica

En los experimentos de registro crónico, se han utilizado resinas acrílicas dentales de autocurado como base de montaje para electrodos o sondas de microdiálisis. Dado que estas...

En experimentos crónicos de electrofisiología o microdiálisis, se ha utilizado ampliamente la resina dental autopolimerizable como base de montaje para electrodos o sondas de microdiálisis. Dado que estos acrílicos no se adhieren a la superficie ósea, se han empleado tornillos como anclajes. Sin embargo, en animales pequeños experimentales, como FIEs o ratones, el cráneo es muy frágil y no puede sostener con éxito los anclajes.A veces, estos tornillos de tobillo causan infección e inflamación del tejido. En este informe, proponemos una nueva aplicación de la resina dental de curado inmediato como base elevada para su montaje. Este material permite la unión directa al cráneo.Por lo tanto, no se requieren tornillos de anclaje y el campo quirúrgico puede reducirse considerablemente. El peso total de una sonda, una cánula guía, un gabinete y una base de montaje era inferior a un gramo. Experiencias previas muestran que el efecto de unión se mantiene durante más de dos meses.Esta técnica también puede utilizarse con otros animales de experimentación como ratones, peces, etc. Se grabaron en video dos implementaciones en dos barras. En esta demostración en video, se seleccionaron y utiliz

application-light-cured-dental-adhesive-resin-for-mounting-electrodes

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El video muestra un procedimiento para implantar una unidad de electrodo multicanal bidireccional inalámbrica en el cerebro de una rata para grabar y estimular redes neuronales multicanal.

Implante de un sistema inalámbrico de microelectrodos bidireccionales en el cerebro de una rata

Las técnicas tradicionales de fijación de la cabeza han utilizado marcos metálicos unidos al cráneo como interfaz para el aparato de fijación de la cabeza. Este protocolo demuestra una técnica de fijación de la cabeza basada en moldeo de resina acrílica sin marco para tareas de comportamiento en roedores.

Técnica de fijación en el acrílico resina de moldeo basado en Jefe en roedores

Un colorante radiométrica sensible al pH se usa en combinación con microscopía confocal de barrido láser y análisis digital de imágenes para monitorizar el pH extracelular en biofilms dentales, en tiempo real.

Imaging radiométrica de pH extracelular en los biofilms dentales

Presentamos métodos para la construcción de electrodos que registren simultáneamente la actividad neuronal extracelular y liberen múltiples sustancias neuroactivas en las proximidades de los sitios de registro en ratones despiertos. Esta técnica permite el análisis detallado de las entradas sinápticas locales putativas a la neurona de interés.

Extracelular de grabación de la actividad neuronal junto con la aplicación de sustancias Microiontophoretic neuroactivos en ratones Awake

Los microelectrodos afilados permiten una caracterización electrofisiológica precisa de la salida de fotorreceptores e interneuronas visuales en Drosophila viva. Aquí mostramos cómo usar este método para registrar respuestas de voltaje de alta calidad de células individuales a la estimulación de luz controlada. Este método es ideal para estudiar el procesamiento de la información neuronal en ojos compuestos de insectos.

Método electrofisiológico para registrar las respuestas de voltaje intracelular<em&gt; Drosophila</em&gt; Los fotorreceptores y interneuronas a la luz Estímulos<em&gt; En Vivo</em

Aquí, describimos un método para microdiálisis en vivo analizar liberación de aspartato y glutamato en el hipocampo ventral de ratas epilépticas y no epilépticas, en combinación con las grabaciones de EEG. Concentraciones extracelulares de aspartato y glutamato pueden ser correlacionadas con las diferentes fases de la enfermedad.

Microdiálisis de aminoácidos excitatorios durante las grabaciones de EEG en mover libremente las ratas

La contracción del cemento dental durante el curado desplaza la placa base. Este protocolo minimiza el problema al crear una base inicial del cemento dental que deja espacio para cementar la placa base. Semanas más tarde, la placa base se puede cementar en posición en este andamio con poco cemento nuevo, reduciendo así la contracción.

Uso de placas base y un miniscopio preanclado con una lente objetiva para la investigación transitoria de calcio en ratones

Este protocolo describe un procedimiento para construir matrices de microelectrodos de fibra de carbono para registros electrofisiológicos in vivo crónicos y agudos en ratones(Mus musculus)y hurones(Mustela putorius furo) de múltiples regiones cerebrales. Cada paso, después de la compra de fibras de carbono en bruto para la implantación de matrices de microelectrodos, se describe en detalle, con énfasis en la construcción de matrices de microelectrodos.

Construcción e implementación de matrices de microelectrodos de fibra de carbono para grabaciones in vivo crónicas y agudas

Aquí, presentamos un sistema de implante de sonda liviano y rentable para electrofisiología crónica en roedores optimizado para la facilidad de uso, la recuperación de la sonda, la versatilidad experimental y la compatibilidad con el comportamiento.

El implante DREAM: un sistema de implantes ligero, modular y rentable para la electrofisiología crónica en ratones de cabeza fija y de comportamiento libre

Hemos desarrollado un enfoque simplificado y rentable para la fabricación de electrodos y hemos realizado grabaciones de señales en múltiples regiones en ratones que se mueven libremente. El uso de la optogenética, junto con la electrofisiología multirregional y el registro de señales de calcio, permitió la revelación de las actividades neuronales en todas las regiones del modelo de convulsiones.

Un método integrado para crear optrodes electrofisiológicos flexibles y convenientes para el registro in vivo en múltiples regiones

Este protocolo describe un método quirúrgico en dos fases para crear una ventana craneal grande, resellable y que salve la duramadre en ratones. Esta técnica permite registros electrofisiológicos crónicos y multimodales de redes profundas del cerebro distribuido, como la Red de Modos Predeterminados, durante varias semanas.

Protocolo quirúrgico para una ventana craneal grande y resellable que permite grabaciones electrofisiológicas longitudinales y multimodales de la red de modo predeterminado del ratón

Aprende a aplicar resina dental fotocurable para montar electrodos o sondas de microdiálisis en experimentos crónicos. Este método permite el pegado directo al cráneo sin tornillos, reduciendo inflamación y mejorando la estabilidad en neurociencia.

Aplicación de curado con luz Resina Adhesivo Dental para los electrodos de montaje o sondas de microdiálisis en experimentos crónica (Video) | JoVE Journal

Aplicación de curado con luz Resina Adhesivo Dental para los electrodos de montaje o sondas de microdiálisis en experimentos crónica

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