Name: Generazione di piante Composite in Medicago truncatula Per saggi nodulazione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 37 s
Description: Scopri come generare piante composite con radici transgeniche in Medicago truncatula per studiare la nodulazione. Questo metodo rapido consente di ottenere tessuto transgenico in poche settimane senza colture in vitro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Gli autori desiderano ringraziare il Dr. Chris Taylor (Ohio State University) per introdurre la tecnologia peloso di root per il nostro laboratorio e Drs. Senthil Subramanian (South Dakota State University), Juan Zhang (Ludong University, Shandong in Cina) per migliorare il protocollo. Ringraziamo anche il Dott. Cheng Hao (Agricoltura Nanjing University) per la aiuta a fare questo video. Questo lavoro è sostenuto in parte da finanziamenti DOE (DE-SC0001295), NSF (MCB-0923779) e USDA (2010-65116-20514) per OY

Il seguente protocollo è stato utilizzato per generare piante radice pelosa composito in una specie di legume modello M. truncatula. Protocolli simili sono stati adattati per almeno otto specie vegetali 1-4. Abbiamo usato M. piante radice truncatula peloso composito per studiare le funzioni del gene in radice e lo sviluppo dei noduli. Il protocollo è stato suddiviso in quattro sezioni: 1) i materiali vegetali preparazione, 2) impianti di generazione radice pelosa compositi; 3) simbiotica Rhizobium infezione e 4) l'identificazione radice transgenici. Abbiamo utilizzato il vettore binario contenente la proteina verde fluorescente (GFP) gene come reporter per lo screening radici nelle piante transgeniche composito 3. Rispetto agli antibiotici a base di selezione, GFP-screening è veloce, facile e poco costoso. Nel nostro costrutto, la ER-espressione del gene GFP-ottimizzato è guidata dal promotore super-ubiquitina, che ha forti segnali GFP costitutivo nelle radici transgenici, che permette di distinguere agevolmente le radici transgeniche e non transgeniche. 1. Preparazione Piante <ol><li> M. semi truncautla sono raccolti da piante coltivate in una serra (50% di umidità relativa, 16 / 8 h luce / buio, 22/18 ° C giorno / notte temperatura). Semi maturi possono essere conservati a 4 ° C. </li><li> Circa 100 semi sono scarificati in 10 ml di acido solforico concentrato (95-98%, Sigma-Aldrich, MO) per 10 minuti con agitazione periodica. </li><li> I semi sono 5-7 volte risciacquati con acqua sterile e scuotendo con cautela. </li><li> I semi vengono poi immersi in acqua a temperatura ambiente per 6 ore e conservato a 4 ° C per 36-48 ore per sincronizzare la germinazione. </li><li> Circa il 20-30 semi sono diffuse su suoli umidi carte da filtro posto in una capsula di Petri. Essi sono mantenuti a 22 ° C, con 16 / 8 h ciclo luce / buio, e 40 μmol.m -2. S -1 intensità della luce, per 5-6 giorni. </li><li> Piantine germinate vengono trasferiti nel terreno e messo in serra per un mese. </li></ol> 2. Generazione Piante Root Peloso Composite <ol><li> Costruisce binari che trasportano i geni di interesse sono state trasformate in A. rhizogenes utilizzando protocolli standard. Abbiamo progettato una serie di vettori binari contenenti il gene GFP come marcatore che facilitano il controllo dei tessuti transgenici. Questi vettori contengono vari promotori e tutti hanno siti clonazione Gateway (Invitrogen, Carlsbad, CA) per la sovra-espressione o silenziamento dei geni mirati 3,5. </li><li> Rhizogenes A. è coltivato in 50 ml di media LB con un'appropriata selezione antibiotica a 28 ° C per 16-24 ore. </li><li> I batteri sono raccolte e risospese ad una concentrazione finale di 600 OD = 0.3 in una soluzione priva di impianto di azoto nutriente (Tabella 1 e 6). </li><li> Per sostenere la rigenerazione peloso radice, una matrice di supporto sterilizzato ("Lana di Roccia", Hummert internazionale, Earth City, MO), viene tagliato in tasselli di circa 3 cm 3. Abbiamo posto 4 spine in una piastra di Petri. </li><li> Un buco è colpito sulla parte superiore di ogni spina con un puntale per facilitare l'inserimento di espianti. A. rhizogenes (5 ml) viene aggiunto a ogni spina. </li><li> Una sezione sparare con 2-3 gemme ascellari è asportato da un taglio obliquo. L'espianto viene quindi inserito nella presa, e cresciuto a 22 ° C per circa tre settimane. Manteniamo la Medicago espianti senza irrigazione per i primi 10 giorni, poi, l'acqua con 5 ml di azoto senza soluzione quando necessario. Abbiamo trovato che la rimozione del meristema apicale potrebbe diminuire la formazione di radici avventizie. </li></ol> 3. Simbiotica Rhizobium (Sinorhizobium meliloti) Infezione <ol><li> Dopo tre settimane, alcune radici avventizie uscirà dalla lana di roccia. Le piante radice pelosa compositi vengono trasferiti in sabbia o vermiculite (sterilizzato), con o senza la lana di roccia. Esse vengono coltivate in serra a 22 ° C, 16 / 8 h ciclo luce / buio, e 300 μmol.m -2. S -1 intensità della luce per una settimana di più. </li><li> Prima di rizobi ​​infezione, S. meliloti 1201 è colto in 50 ml di estratto di lievito-mannitolo medio per 7 giorni a 30 ° C (tabella 2 e 6,7). </li><li> Risospese cellule rizobi ​​sono diluiti ad una concentrazione finale di 600 OD = 0.08 usando la soluzione di nutrizione azoto libero. A 10 ml sospensione fresca di S. meliloti è stato applicato a ciascun impianto composito di indurre la formazione di noduli. </li></ol> 4. Radice di identificazione transgenici <ol><li> Due settimane dopo l'inoculazione rizobi, le piante composite sono sradicate dal lavaggio in acqua. Le radici possono essere facilmente separato dalla sabbia o perlite in acqua. </li><li> Abbiamo posto le radici peloso sotto un microscopio a raggi UV (Nikon SMZ1500, eccitazione 460-500nm, 505nm dicroico, Barriera oltre 510nm). Le radici sono transgenici GFP positive e le radici avventizie sono GFP negativi. Abbiamo poi raccogliere le radici according il segnale GFP, e contare il numero di noduli, misurare la lunghezza radice, e calcolare la densità laterale root. Le radici GFP negativi sono utilizzati come controllo. </li></ol> 5. Rappresentante dei risultati Nel nostro esperimento, le radici dei capelli nuova rigenerata dal espianti in 2-3 settimane dopo la A. rhizogenes inoculazione. Sotto il microscopio a raggi UV, le radici transgenici portatori del gene GFP mostrano una forte fluorescenza verde (Fig. 1). La quantità di radici rigenerate e la parte delle radici GFP positive dipendono dalle condizioni di espianti e l'ambiente di crescita composito plants.On media, il 25% delle radici prodotte erano transgenici radici pelose 3. Per aumentare l'efficienza della trasformazione, 1) il destino coperchio di plastica, come mostrato nel video, è sufficiente per mantenere l'umidità nel cassetto crescita per i primi giorni, e solo piante richiedono poca acqua nei primi giorni. Irrigazione eccessiva è dannosa per la formazione delle radici pelose, 2) la concentrazione di innoculant Agrobacterium è importante per la trasformazione. Quantità eccessiva di cellule non sono utili alla formazione delle radici pelose o formazione di noduli. Per la formazione di noduli, la soluzione di irrigazione deve essere azoto-free, altrimenti, noduli di pochi forma. Le piante radice pelosa composito può essere generato usando cotiledoni o piantine Entact come materiale di partenza. Solo piccole modifiche del protocollo di cui sopra sono ncessary per generare radici pelose da altri tessuti 8. È importante sottolineare che ogni radice peloso è un evento di trasformazione indipendente. Pertanto, i fenotipi osservati in un impianto di compositi sono la somma di eventi diversi transforamtion che doveva essere confermata da ripetizioni in diverse piante composite <img src="/files/ftp_upload/2633/2633fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. A. radici transgeniche può essere risolto dalle radici pelose. Noduli B. si sono formati negli impianti radice pelosa composito. Abbiamo messo quattro settimane di età M. piante radice truncatula peloso sotto il microscopio a raggi UV e alle radici GFP positive possono essere facilmente identificati. (Freccia rossa: root GFP; freccia gialla: non GFP root) <table border="1"><tbody><tr><td> Stock </td><td> g/200ml </td><td> ml di brodo / litro </td></tr><tr><td> MgSO 4 0,7 H 2 O </td><td> 12,3 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> CaCl 2 .2 H 2 O </td><td> 14,7 </td><td> 4 </td></tr><tr><td> K 2 HPO 4 .3 H 2 O </td><td> 6,8 </td><td> 1 </td></tr><tr><td> K 2 SO 4 </td><td> 11 </td><td> 4 </td></tr><tr><td> Fe Cl 3 .6 H 2 O </td><td> 0,49 </td><td> 2,5 </td></tr><tr><td> Micronutrienti </td><td> Vedi sotto </td><td> 1 </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> Micronutrienti </td><td> g per litro </td></tr><tr><td> H 3 BO 3 </td><td> 0,142 </td></tr><tr><td> MnSO 4. H 2 O </td><td> 0,077 </td></tr><tr><td> ZnSO 4 0,7 H 2 O </td><td> 0,1725 </td></tr><tr><td> CuSO 4 .5 H 2 O </td><td> 0,037 </td></tr><tr><td> Namoo 4. H 2 O </td><td> 0,024 </td></tr><tr><td> CoCl 2. H 2 O </td><td> 0,0025 </td></tr><tr><td> NISO 4 </td><td> 0,001 </td></tr></tbody></table> Tabella 1. Nitogen senza soluzione di nutrizione <table border="1"><tbody><tr><td> K 2 HPO4 </td><td> 0,5 g </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 0.1g </td></tr><tr><td> MgSO 4 · 7H 2 O </td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> Estratto di Lievito </td><td> 0.4g </td></tr><tr><td> Mannitolo </td><td> 10g </td></tr><tr><td> pH = 6.8 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabella 2. Estratto di lievito medio mannitolo (per litro)

<ol><li>Limpens, E., Ramos, J., Franken, C., Raz, V., Compaan, B., Franssen, H., Bisseling, T., Geurts, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+in+Agrobacterium+rhizogenes-transformed+roots+of+Arabidopsis+and+Medicago+truncatula%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Bot%22%5BJournal%5D)">RNA interference in Agrobacterium rhizogenes-transformed roots of Arabidopsis and Medicago truncatula.</a> J. Exp. Bot. 55, 983-992 (2004).</li>
<li>Collier, R., Fuchs, B., Walter, N., Kevin, L. W., Taylor, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vitro+composite+plants%3A+an+inexpensive%2C+rapid+method+for+root+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Ex vitro composite plants: an inexpensive, rapid method for root biology.</a> Plant J. 43, 449-457 (2005).</li>
<li>Zhang, J., Subramanian, S., Stacey, G., Yu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flavones+and+flavonols+play+distinct+critical+roles+during+nodulation+of+Medicago+truncatula+by+Sinorhizobium+meliloti%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Flavones and flavonols play distinct critical roles during nodulation of Medicago truncatula by Sinorhizobium meliloti.</a> Plant J. 57, 171-183 (2009).</li>
<li>Boisson-Dernier, A., Chabaud, M., Garcia, F., Becard, G., Rosenberg, C., Barker, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium-rhizogenes-transformed+roots+of+Medicago+truncatula+for+the+study+of+nitrogen-fixing+and+endomycorrhizal+symbiotic+associations%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Plant-Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium-rhizogenes-transformed roots of Medicago truncatula for the study of nitrogen-fixing and endomycorrhizal symbiotic associations.</a> Mol. Plant-Microbe Interact. 14, 695-700 (2001).</li>
<li>Zhang, J., Subramanian, S., Zhang, Y., Yu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flavone+synthases+from+Medicago+truncatula+are+flavanone-2-hydroxylases+and+are+important+for+nodulation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Flavone synthases from Medicago truncatula are flavanone-2-hydroxylases and are important for nodulation.</a> Plant Physiol. 144, 741-751 Forthcoming.</li>
<li>Subramanian, S., Hu, X., Lu, G., Odelland, J., Yu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promoters+of+two+isoflavone+synthase+genes+respond+differentially+to+nodulation+and+defense+signals+in+transgenic+soybean+roots%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The promoters of two isoflavone synthase genes respond differentially to nodulation and defense signals in transgenic soybean roots.</a> Plant Mol Biol. 54, 623-639 (2004).</li>
<li>Vincent, J. A manual for the practical study of root nodule bacteria International Biological Program Handbook. , Blackwell Science Ltd. Oxford. 1-13 (1970).</li>
<li>Subramanian, S., Graham, M. Y., Yu, O., Graham, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+Interference+of+Soybean+Isoflavone+Synthase+Genes+Leads+to+Silencing+in+Tissues+Distal+to+the+Transformation+Site+and+to+Enhanced+Susceptibility+to+Phytophthora+sojae%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">RNA Interference of Soybean Isoflavone Synthase Genes Leads to Silencing in Tissues Distal to the Transformation Site and to Enhanced Susceptibility to Phytophthora sojae.</a> Plant Physiol. 137, 1345-1353 (2005).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Generazione impianto peloso radice composito è un metodo rapido e semplice per ottenere grandi quantità di materiale transgenico per molte specie dicot. Anche se questo metodo non è possibile produrre sementi transgeniche, può produrre materiale transgenico in poche settimane. Il metodo è particolarmente adatto per le piante che hanno difficoltà a stabilire colture di tessuti o generare trasformanti stabili. Nel corso degli anni, abbiamo utilizzato questa tecnologia per studiare le funzioni del gene, le funzioni di promotore, microRNA, radice e lo sviluppo delle radici laterali, difesa e le risposte allo stress abiotici, nodulazione e altri processi simbiotici, le risposte ormonali, profili metabolici, profilazione dell&#39;espressione genica, analisi proteomica, e altri processi biologici. Il protocollo è robusto e replicabile.

generazione di piante composite in medicago truncatula per saggi nodulazione

Generation of Composite Plants in Medicago truncatula used for Nodulation Assays

Simile a tumerfaciens Agrobacterium, rhizogenes Agrobacterium può trasferire DNA estraneo nelle cellule vegetali in base alla radice autonomo che induce (Ri) plasmide. A. rhizogenes può causare la formazione pelosa root su tessuti vegetali e piante composite forma dopo la trasformazione. Su queste piante composite, alcune delle radici rigenerate sono transgenici, portando il tipo selvatico T-DNA e il vettore binario progettato, mentre i germogli sono ancora non transgenico, serve a fornire energia e sostenere la crescita. Queste piante radice pelosa composito non producono semi transgenici, ma ci sono una serie di importanti caratteristiche che rendono queste piante composite molto utile nella ricerca delle piante. In primo luogo, con una vasta gamma degli ospiti, A. rhizogenes può trasformare molte specie di piante, soprattutto dicotiledoni, permettendo l&#39;ingegneria genetica in una varietà di specie. In secondo luogo, A. rhizogenes infettare i tessuti e espianti direttamente, senza colture di tessuti prima trasformazione è necessaria per ottenere piante composite, che li rende ideali per trasformare specie vegetali recalcitranti. Inoltre, i tessuti radice transgenico può essere generato in poche settimane. Per Medicago truncatula, possiamo ottenere radici transgenico nel più breve di tre settimane, più velocemente del normale floreali tuffo trasformazione di Arabidopsis. Nel complesso, il peloso tecnologia dell&#39;impianto radice composito è uno strumento versatile e utile per studiare le funzioni dei geni e radice-fenotipi correlati. Qui mostriamo come le piante radice pelosa compositi possono essere utilizzati per studiare le interazioni pianta-Rhizobium e nodulazione nelle difficili da trasformare la specie M. truncatula.

Si dimostra come le piante radice pelosa compositi possono essere utilizzati per studiare le interazioni pianta-Rhizobium e nodulazione nelle difficili da trasformare la specie<em&gt; Medicago truncatula</em&gt;.

Generazione di piante Composite in Medicago truncatula Per saggi nodulazione

Analogamente ad Agrobacterium tumefaciens, Agrobacterium rhizogenes può trasferire DNA estraneo all'interno di cellule vegetali basandosi sulla regione inducente le radici (Ri) autonoma...

Ciao, mi chiamo Oliver Yu del Dan Plant Science Center. Oggi vi mostreremo come generare piante di Ute Compote mediante Agrobacterium Ogn. Questa tecnica è stata introdotta al Dan Center dal Dottor Chris Taylor, attualmente presso la Ohio State University.Molti dei miei ex membri del gruppo hanno migliorato queste tecniche nel corso degli anni e oggi il mio attuale membro del gruppo, il dott. Stone e Mao, hanno realizzato questo video per mostrare come vengono prodotti i piani compositi di Harry Root. Gli Agrobacterium ZOS sono molto simili all'agrobacterium tumefaciens poiché introducono DNA estraneo nelle piante, ma gli ZOS possono indurre una formazione radicale maggiore nei tessuti di tipo selvatico, generando piante compositive come questa. Pertanto, in queste piante composite, alcune radici sono transgeniche mentre gli apici caulinari rimangono di tipo selvatico.Pertanto, questa tecnologia non produrrà semi transgenici. Tuttavia, esistono tre principali vantaggi delle piante con elevata capacità di accogliere il campilobactere che rendono questa tecnologia molto utile. In primo luogo, molte specie vegetali, in particolare le specie dicotiledoni, possono essere trasformate mediante batteri agrobatterici.In secondo luogo, non dobbiamo stabilire una coltura tessutale prima della trasformazione. Possiamo utilizzare diverse parti della pianta, come piantine, getti e co, per generare direttamente piante campy. Infine, possiamo ottenere tessuto radicale transgenico nell'arco di poche settimane.Per le trasformazioni transgeniche di soia e medic, possiamo ottenere radici transgeniche in appena tre settimane, più velocemente rispetto alla trasformazione OPIS. Nel complesso, la tecnologia delle piante con radici citochinina-alte è uno strumento molto utile per lo studio delle funzioni geniche e dei fenotipi legati alle radici. No. Salve, mi chiamo Ong.Ciao, mi chiamo, ecco il mio operatore Bill. Oggi presenteremo il protocollo della pianta composita Harry root. Sì, utilizziamo questo protocollo in diversi nostri progetti.Già, abbiamo iniziato, sì. Sì. Per la nostra dimostrazione, utilizzeremo meta cargo Tula come esempio. Questi sono baccelli maturi di meta cargo.Mettere i baccelli in una capsula di macinazione e quindi macinare i baccelli con un movimento lungo e deciso. Separare i semi dai baccelli agitando delicatamente e posizionare i semi in un tubo da centrifuga da 50 millilitri. Aggiungere quindi cinque millilitri di acido solforico concentrato.Scalpello molto accuratamente. Richiede circa 10 minuti. Agitare il tubo con vortice acido da due a tre volte.Durante il trattamento acido, il tegumento del seme diventerà di colore giallo. Rimuovere l'acido solforico dal tubo e risciacquare i semi almeno cinque volte con acqua sterile. Immergere i semi in acqua deionizzata a temperatura ambiente per sei ore, quindi mantenerli a quattro gradi centigradi per due giorni.Per sincronizzare la germinazione. Distribuire da 20 a 30 semi su carta filtrante umida nella piastra di Petri. Dopo cinque-sei giorni, trasferire le piantine nel terreno e farle crescere in serra per quattro settimane.Per la trasformazione delle piante composite, utilizziamo normalmente il ceppo di agrobatterio Zony K 5 99. Il vettore shuttle o il vettore binario possono essere trasformati nel ceppo K 5 99 seguendo il protocollo standard di trasformazione di agrobacterium tumefaciens. Inoculare l'agrobatterio, coltivarlo a 30 gradi centigradi per 16-24 ore; al termine del periodo di crescita, raccogliere le cellule posizionando la soluzione di coltura in un tubo da centrifuga da 50 millilitri.Eseguire la centrifugazione a 5.000 G per 30 minuti. Risospendere il pellet con soluzione nutritiva priva di azoto. Assicurarsi di diluire le cellule di agrobatterio a 0,3 a OD 600.Questa concentrazione è importante per una trasformazione massima. Utilizziamo la roccia di scisto come matrice di supporto. L'uso di questo materiale è importante per una trasformazione ad alta frequenza.Tagliare la parete rocciosa nelle dimensioni corrette. Inserire un tappo. Praticare un foro nella parte superiore di circa uno e mezzo a due centimetri di diametro. Utilizzando una punta di pipetta, aggiungere cinque millilitri di soluzione di Agrobacterium Zony ri-sospesa in ogni tappo.Selezionare un tratto di fusto con due o tre gemme ascellari ed effettuare un taglio obliquo. Inserire i tralicci vegetali nel foro nella parete rocciosa. Collocare le piante tagliate in una camera di crescita o sul banco del laboratorio per tre settimane.Aggiungere cinque millilitri di soluzione nutritiva in ogni spina ogni 10 giorni. Dopo tre settimane, le radici si rigenerano dal lato tagliato. Immergere la pianta in acqua.Rimuovere con cura la parete rocciosa ammorbidita senza danneggiare le radici. Assicurarsi di rimuovere completamente la parete rocciosa. È possibile trasferire le piante composite con radici capillari in sabbia o perlite. Per esperimenti di simbiosi, coltivare il rizobio in un mezzo di estratto di lievito e manitolo per sette giorni a 30 gradi Celsius.Raccogliere le cellule zoia disgelate. Sospendere il pellet con la soluzione nutritiva priva di azoto. Diluire la soluzione fino a un valore di 0,08 a OD 600.Aggiungere 10 millilitri di soluzione ZOA a ciascuna coltura di pianta composita, coltivare la pianta per altre due o tre settimane per consentire la formazione dei noduli. Rimuovere la sabbia dalle piante compositive estirpandole e lavandole. Utilizzare l'espressione della proteina fluorescente verde per verificare la radice transgenica.Utilizzerai un microscopio a fluorescenza per eseguire questa procedura. Tutti i nostri costrutti di radici pelose possiedono una cassetta GFP costitutiva per la selezione delle linee transgeniche. Questa immagine mostra le piante composite con radici pelose transgeniche per GFP osservate al microscopio a fluorescenza.Le radici transgeniche con una fluorescenza verde più intensa sono facili da distinguere rispetto alle radici non transgeniche. I noduli si formano nella radice pelosa delle piante composite. Ecco il protocollo completo.Anche in questo caso, la generazione di piante composite con radici pelose è un metodo rapido e semplice per ottenere grandi quantità di tessuto transgenico, specialmente per specie diop. Sebbene questo metodo non permetta di ottenere semi transgenici, può produrre materiale transgenico in poche settimane. È particolarmente adatto per piante che presentano difficoltà nell'instaurare colture di tessuti e nella trasformazione.Nel corso degli anni, abbiamo utilizzato questa tecnologia per studiare le funzioni geniche, le funzioni dei promotori, i microRNA, lo sviluppo della radice principale e delle radici laterali, la risposta allo stress difensivo e antibiotico, la nodulazione e altri processi simbiotici. Abbiamo analizzato la risposta ormonale, il profilo metabolico, il profilo genico e l'analisi proteomica impiegando piante composite con radici superiori. Speriamo che questo video vi aiuti ad adattare questo sistema alla vostra specie preferita.È possibile contattarci per domande relative a questa tecnologia e in bocca al lupo.

generation-composite-plants-medicago-truncatula-used-for-nodulation

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Una morte saggio basato su cellule di PTI in piante di Nicotiana benthamiana è descritto.

Test per patogeni associati modello molecolare (PAMP)-trigger Immunità (PTI) nelle piante

Due metodi diversi per le piante schermo con nematodi galligeni sono descritti. Gli approcci descritti includono high-throughput schermi con nematodi in modo non distruttivo facilitare l'uso di queste piante in programmi di allevamento.

Schermi throughput elevato e basso con Nematodi galligeni Meloidogyne spp.</em

Crescita delle piante truncatula Medicago in simbiosi con i batteri azoto-fissatori meliloti Sinorhizobium nei singoli, microcosmi sterili fatto da lastre di laboratorio standard consente l'esame frequente dei sistemi di radici e noduli senza compromettere la sterilità. Le piante possono essere mantenuti in queste camere di crescita fino a 9 settimane.

Singola pianta, sterili Microcosmi per nodulazione e crescita della pianta delle leguminose<em&gt; Medicago truncatula</em&gt; Con il rhizobial Symbiont<em&gt; Sinorhizobium meliloti</em

Mass spettrometria di imaging (MSI) è un potente strumento che può essere utilizzato per scoprire e identificare le varie specie chimiche nei tessuti intatti, preservando i composti nel loro ambiente naturale, in grado di fornire nuove intuizioni in processi biologici. Qui un metodo MSI sviluppato per l'analisi di piccole molecole è descritto.

MALDI-Mass spettrometria di imaging per le inchieste sui metaboliti in<em&gt; Medicago truncatula</em&gt; Root noduli

L'obiettivo è illustrare che il modello di leguminose Medicago truncatula può essere facilmente utilizzato per studiare la regolazione dell'embriogenesi precoce delle piante per integrare il modello Arabidopsis non leguminoso. La morfologia dei baccelli è collegata alle fasi di embriogenesi zigotica e viene fornito anche un protocollo per raccogliere gli embrioni utilizzando la coltura tissutale.

Protocolli per ottenere Zygotic e Somatic embrioni per lo studio della regolazione dello sviluppo embrionale precoce nel Modello leguminose<em&gt; Medicago truncatula</em

Questo protocollo fornisce la procedura sperimentale e informazioni su reagenti, attrezzature e strumenti di analisi per i ricercatori che sono interessati a effettuare analisi di ibridazione genomica comparativa (CGH) matrice di intero genoma di variazioni del numeri di copie in piante.

Una basata su Array Comparative Genomic ibridazione piattaforma per efficiente rilevamento di copia numero variazioni nei mutanti veloce neutrone-indotta Medicago truncatula

Questo documento descrive due metodi per quantificare le risposte della difesa nell'Arabidopsis thaliana in seguito all'esposizione agli elicitori immunitari: il scoppio ossidativo transitorio e l'inibizione della crescita delle piantine.

Modellazione-Triggered Ossidative Burst e Seedling Growth Assays in Arabidopsis thaliana

Parasponia andersonii è un albero tropicale in rapida crescita che appartiene alla famiglia Cannabis (Cannabaceae) e può formare noduli di radice che fissano l'azoto in associazione con il rizobium. Qui, descriviamo un protocollo dettagliato per le analisi genetiche inverse in P. andersonii basato su Agrobacterium tumefaciens- mediato trasformazione stabile e modifica del genoma CRISPR/Cas9.

Trasformazione, editing del genoma e fenotipizzazione dell'azoto-fixing Tropical Cannabaceae Tree Parasponia andersonii

Qui, forniamo il protocollo dettagliato di un metodo di trasformazione in un'unica fase mediato da Agrobacterium tumefaciens per produrre piante composite.

Un metodo efficiente e riproducibile per la produzione di piante composite mediante trasformazione delle radici pelose a base di Agrobacterium rhizogenes

Utilizzando la stimolazione elettrica ad alta frequenza, il sequestro-simile può essere indotta...

Saggi Neurocircuit per Sequestri in mutanti di Epilessia Drosophila</em

Scopri come generare piante composite con radici transgeniche in Medicago truncatula per studiare la nodulazione. Questo metodo rapido consente di ottenere tessuto transgenico in poche settimane senza colture in vitro.

Generazione di piante Composite in Medicago truncatula Per saggi nodulazione

Esplora altri video