Name: Micro-dissezione del cervello di ratto per estrazione RNA o proteine da Regione specifiche del cervello (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: Impara la micro-dissezione del cervello di ratto per estrarre RNA e proteine da regioni specifiche come bulbo olfattivo, corteccia frontale, striato e ippocampo. Questa tecnica preserva l'integrità dei campioni per studi sulle malattie neurodegenerative.

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Fase 1 Il sacrificio del ratto secondo i protocolli stabiliti. Togliere il cervello dal cranio e sciacquarlo in ghiaccio freddo DEPC trattate acqua Milli Q per rimuovere il sangue di superficie. Fase 2 Mettere sul piatto freddo dei metalli. Tagliare il cervello bi-metà in emisfero destro e sinistro. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_3/269_Figure-01.png" alt="269_Figure-01" width="474" height="224" /> Figura 1. Le posizioni di taglio dal punto di vista mediale dell&#39;emisfero ratto Fase 3 Raccogliere il bulbo olfattivo subito dopo il primo taglio. Flash congelare il campione in azoto liquido e conservare a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_4/269_Figure-02.png" alt="269_Figure-02" width="564" height="145" /> Figura 2. Dissezione bulbo olfattivo Fase 4 Raccogliere il diritto corteccia frontale dopo il secondo taglio, usando una lama e un Dumont n. 5 pinze. Flash congelare il campione in azoto liquido e conservare a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_5/269_Figure-03.png" alt="269_Figure-03" width="566" height="220" /> Figura 3. Corteccia frontale dissezione Fase 5 Raccogliere lo striato (nucleo caudato) subito dopo il terzo taglio con l&#39;aiuto di due pinzette Dumont n.5. Flash congelare il campione in azoto liquido e conservare a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_6/269_Figure-04.png" alt="269_Figure-04" width="555" height="208" /> Figura 4. Striato (nucleo caudato) dissezione Fase 6 Per raccogliere l&#39;ippocampo, inserire il lato ventrale del cervello e quindi rimuovere mesencefalo per esporre l&#39;ippocampo. Sezionare l&#39;ippocampo dalla corteccia con due pinze No.5 Dumont. Flash congelare il campione in azoto liquido e conservare a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_7/269_Figure-05.png" alt="269_Figure-05" width="559" height="191" /> Figura 5. Hippocampus dissezione

<ol><li>Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).</li>
<li>Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).</li>
</ol>

Gli animali sono stati trattati secondo il protocollo per l&#39;uso di animali nella ricerca approvato dalla Commissione per l&#39;uso di animali vivi in ​​didattica e la ricerca (CULATR) presso l&#39;Università di Hong Kong e secondo il National Institutes of linee guida per l&#39;uso sanità animale.

Differenti regioni del cervello associate con diverse malattie neurodegenerative. Per esempio, corteccia frontale e nello striato rapportarsi con la malattia di Parkinson s mentre l&#39;ippocampo si riferisce alla malattia di Alzheimer. Preciso micro-dissezione del cervello ci permette di rilevare i cambiamenti mRNA e proteine ​​nella regione malato con maggiore precisione.

<table><tbody><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Strumenti per dissezione</td><td></td><td></td><td>Piastra di metallo, pinze, lama, ecc. Avvolti singolarmente in foglio di alluminio e riscaldati a 180 °C per otto ore per eliminare le RNasi. Raffreddati a fondo prima dell'uso.</td></tr></tbody></table>

micro-dissezione del cervello di ratto per estrazione rna o proteine ​​da regione specifiche del cervello

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-dissezione del cervello di ratto in varie regioni è estremamente importante per lo studio di diverse malattie neurodegenerative. Questo video dimostra micro-dissezione di quattro regioni del cervello importanti includono bulbo olfattivo, la corteccia frontale, ippocampo e striato in tessuto fresco cervello di ratto. Consigli utili per la rimozione rapida delle rispettive regioni al fine di evitare l&#39;RNA e la degradazione delle proteine ​​del tessuto sono dati.

Micro-dissezione del cervello di ratto per estrazione RNA o proteine ​​da Regione specifiche del cervello

La microdissezione del cervello di ratto in diverse regioni è estremamente importante per lo studio di differenti malattie neurodegenerative. Questo video dimostra...

Ciao, sono Quint del Dipartimento di Anatomia dell'Università di Hong Kong. Oggi illustrerò come eseguire la dissezione microscopica del cervello rosso in quattro vie principali: corteccia foto-fattoriale, strato s e ippocampo. Ecco un'immagine schematica che mostra come dissechiamo il cervello.Ci sono tre tagli. Il primo piano di taglio si trova all'innesto tra il bulbo olfattivo e la corteccia frontale. Il secondo piano di taglio è all'incirca corrispondente all'area del corpo calloso.Il terzo piano di taglio si trova all'estremità anteriore dei fonici. Dopo tre tagli, si otterranno quattro percorsi cerebrali. Sul lato sinistro è presente un fattore.Sul lato destro si trova l'ippocampo. La corteccia frontale si trova tra il primo e il secondo taglio. La nucleasi codificante, che fa parte dello strato, si trova tra il secondo e il terzo taglio sull'emisfero cerebrale fresco.È molto importante riconoscere prima il corpo calloso e le strutture foniche. Successivamente possiamo localizzare facilmente i tre piani di taglio. Il primo piano di taglio si trova al livello della connessione tra il bulbo olfattivo e la corteccia frontale.Il secondo piano di taglio si trova a un'ion del corp

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Il profilo dell'espressione dell'RNA in regioni cerebrali murine discrete richiede una strategia di raccolta dei tessuti precisa e ripetibile. Viene qui descritto un protocollo che utilizza sia il sezionamento coronale del cervello sia la microdissezione assistita da corer tissutale. Il rendimento e la qualità dell'RNA totale ottenuti dai campioni risultanti confermano l'utilità del metodo delineato.

Non Laser Capture Microscopy approccio per la Microdissezione delle Regioni discreti cervello di topo per la totale isolamento di RNA e valle Next-Generation Sequencing e profili di espressione genica

Descriviamo un modello murino del disturbo post traumatico da stress (PTSD) che rivela le alterazioni persistenti della funzione neuroendocrina e del ritardato a lungo termine, di risposta paura esagerata, caratteristici dei pazienti con PTSD. Il modello animale e metodi descritti qui sono utili per correlare biomarcatori nei nuclei del cervello, che sono meccanicistica ma non possono essere misurati nei pazienti, con biomarcatori nelle periferie globuli bianchi, che può.

Biomarcatori in un modello animale per Rivelare correlati neurali, ematologiche, e comportamentali di PTSD

Questo video mostra il processo di isolamento dei microvasi cerebrali dai ratti soppressi. Comprende la dissezione del cervello, la pulizia del tessuto e la digestione meccanica, seguita da centrifugazione ripetuta per isolare la frazione pura dei microvasi.

Un metodo per l'isolamento delle unità neurovascolari dal cervello di ratto

Questo video mostra il rilevamento della sintesi dell'RNA del recettore della serotonina utilizzando sonde oligonucleotidiche nel tessuto cerebrale di ratto affetto da sindrome serotoninergica. Il protocollo include il pretrattamento tissutale, l'ibridazione della sonda e il rilevamento enzimatico per visualizzare e quantificare l'espressione dell'RNA del recettore della serotonina al microscopio.

Ibridazione in situ mediante sonde oligonucleotidiche per studiare l'espressione dell'RNA in sezioni cerebrali di ratto

Ci viene descritto come utilizzare la cattura microdissezione laser (LCM) per ottenere popolazioni arricchite di neuroni ippocampali o neuroni singoli da sezioni congelate di cervello di ratto feriti per la successiva analisi di espressione genica mediante real time PCR quantitativa e / o dell'intero genoma microarray.

Laser Microdissezione Cattura di popolazioni Arricchito di neuroni singoli neuroni o per analisi di espressione genica dopo trauma cranico

Analisi dell'espressione genica di un sottogruppo di cellule in un tessuto specifico rappresenta una grande sfida. In questo articolo si descrive come isolare RNA totale di alta qualità da una popolazione di cellule specifiche, combinando un metodo immunomarcatura rapida con microdissezione laser.

RNA isolamento da cellulari sottopopolazioni specifiche utilizzando laser-capture Microdissection combinazione con Rapid immunomarcatura

Qui, è descritto un metodo per l'isolamento dei microvasi cerebrali di ratto e per la preparazione di campioni di membrana. Questo protocollo ha il chiaro vantaggio di produrre arricchito del microvessel campioni con proteina accettabile resa da singoli animali. Campioni possono quindi essere utilizzati per analisi di robusta proteina presso l'endotelio microvascolare cerebrale.

Un metodo semplice e riproducibile per preparare campioni di membrana da microvasi cerebrali appena isolati del ratto

Forniamo un protocollo per l'isolamento della microglia da diverse regioni sezionate di un emisfero cerebrale adulto, seguito dalla preparazione della libreria semiautomatica per il sequenziamento profondo dell'RNA unicellulare di trascrittomi a lunghezza intera. Questo metodo aiuterà a chiarire l'eterogeneità funzionale della microglia in salute e malattia.

Isolamento di Microglia specifico della regione da un emisfero cerebrale di topi adulto per il sequenziamento profondo dell'RNA a singola cellula

Questa procedura descrive la raccolta di regioni cerebrali congelate discrete per ottenere proteine e RNA di alta qualità utilizzando strumenti economici e comunemente disponibili.

Raccolta di regioni cerebrali del roditore congelato per analisi a valle

Presentiamo un protocollo pratico, passo-passo, rapido per la rimozione del cervello del topo e la dissezione di regioni discrete dal tessuto cerebrale fresco. Ottenere regioni cerebrali per l'analisi molecolare è diventato routine in molti laboratori di neuroscienze. Queste regioni cerebrali vengono immediatamente congelate per ottenere dati trascrittomici di alta qualità per l'analisi a livello di sistema.

Microdissezione del cervello di topo in regioni funzionalmente e anatomicamente diverse

La combinazione di microdissezione a cattura laser e RT-qPCR microfluidica fornisce specificità anatomiche e biotecniche nella misurazione del trascrittoma nei singoli neuroni e glia. L'applicazione di metodi creativi con l'approccio biologico di un sistema alle malattie psichiatriche può portare a scoperte nella comprensione e nel trattamento come l'ipotesi dell'antiricompensa della neuroinfiammazione nella dipendenza.

Studiare i driver dell'antiricompensa nel comportamento di dipendenza con metodi di espressione genica anatomicamente specifici a singola cellula

Impara la micro-dissezione del cervello di ratto per estrarre RNA e proteine da regioni specifiche come bulbo olfattivo, corteccia frontale, striato e ippocampo. Questa tecnica preserva l'integrità dei campioni per studi sulle malattie neurodegenerative.

Micro-dissezione del cervello di ratto per estrazione RNA o proteine ​​da Regione specifiche del cervello

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