Micro-dissezione del cervello di ratto per estrazione RNA o proteine da Regione specifiche del cervello
30 agosto 2007
Micro-dissezione del cervello di ratto in varie regioni è estremamente importante per lo studio di diverse malattie neurodegenerative. Questo video dimostra micro-dissezione di quattro regioni del cervello importanti includono bulbo olfattivo, la corteccia frontale, ippocampo e striato in tessuto fresco cervello di ratto. Consigli utili per la rimozione rapida delle rispettive regioni al fine di evitare l'RNA e la degradazione delle proteine del tessuto sono dati.
Ciao, sono Quint del Dipartimento di Anatomia dell'Università di Hong Kong. Oggi illustrerò come eseguire la dissezione microscopica del cervello rosso in quattro vie principali: corteccia foto-fattoriale, strato s e ippocampo. Ecco un'immagine schematica che mostra come dissechiamo il cervello.
Ci sono tre tagli. Il primo piano di taglio si trova all'innesto tra il bulbo olfattivo e la corteccia frontale. Il secondo piano di taglio è all'incirca corrispondente all'area del corpo calloso.
Il terzo piano di taglio si trova all'estremità anteriore dei fonici. Dopo tre tagli, si otterranno quattro percorsi cerebrali. Sul lato sinistro è presente un fattore.
Sul lato destro si trova l'ippocampo. La corteccia frontale si trova tra il primo e il secondo taglio. La nucleasi codificante, che fa parte dello strato, si trova tra il secondo e il terzo taglio sull'emisfero cerebrale fresco.
È molto importante riconoscere prima il corpo calloso e le strutture foniche. Successivamente possiamo localizzare facilmente i tre piani di taglio. Il primo piano di taglio si trova al livello della connessione tra il bulbo olfattivo e la corteccia frontale.
Il secondo piano di taglio si trova a un'ion del corpo calloso, e il terzo piano di taglio è alla punta anteriore dei fonici. Procederemo a dissezionare il cervello e il microscopio. Gli strumenti di dissezione sono mantenuti in ghiaccio secco.
Dopo aver sciacquato questa piastra di ghiaccio con acqua DEPC, abbiamo posizionato un cervello sulla piastra metallica di ghiaccio, dividendolo a metà in due emisferi, separando o isolando la parte superiore dal cortex frontale, raccogliendola e conservandola in azoto liquido. Successivamente, abbiamo iniziato a raccogliere il cortex frontale. Abbiamo tagliato intorno all'estremità anteriore del corpo calloso, tagliato il cortex tric, raccogliendo il tessuto e conservandolo in azoto liquido.
Successivamente, dissechiamo l'elemento dello stelo. Effettuiamo un taglio a livello del piano anteriore, della componente fonica e della commissura anteriore, separiamo il nucleo di rivestimento, lo raccogliamo e lo conserviamo in azoto liquido. Infine, procederemo a dissezionare l'ippocampo.
Prima di tutto, dobbiamo rimuovere il mesencefalo in modo da poter esporre adeguatamente l'ippocampo. Separare l'ippocampo raccolto e conservato in azoto liquido. Diverse regioni cerebrali sono associate a diverse malattie neurodegenerative. Ad esempio, la substantia nigra è associata alla malattia di Parkinson, mentre la corteccia frontale e l'ippocampo sono associate alla malattia di Alzheimer.
La microdissezione precisa del cervello ci consente di rilevare variazioni di mRNA e proteine nella regione.
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Panoramica
Questo video illustra la microdissezione del tessuto cerebrale del ratto in quattro regioni principali: bulbo olfattivo, corteccia frontale, striato e ippocampo. Fornisce utili suggerimenti per l'asportazione rapida di queste regioni al fine di prevenire il degrado di RNA e proteine.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Neuroscienze
- Neuroanatomia
- Malattie neurodegenerative
Sfondo
- La micro-dissezione è fondamentale per lo studio delle regioni cerebrali.
- La comprensione delle diverse malattie neurodegenerative richiede campioni di tessuto precisi.
- Il mantenimento dell'integrità di RNA e proteine è essenziale per una ricerca accurata.
- In questo studio viene utilizzato tessuto cerebrale fresco di ratto per la dissezione.
Scopo dello studio
- Dimostrare tecniche efficaci per la dissezione di regioni cerebrali.
- Fornire indicazioni per mantenere la qualità del tessuto durante la dissezione.
- Facilitare la ricerca sulle malattie neurodegenerative attraverso un corretto prelievo dei campioni.
Metodi Utilizzati
- Microdissezione del cervello di ratto in regioni specificate.
- Utilizzo di immagini schematiche per guidare il processo di dissezione.
- Applicazione di piani di taglio specifici per la rimozione accurata delle regioni.
- Suggerimenti per minimizzare la degradazione di RNA e proteine durante la dissezione.
Risultati principali
- Dissezione riuscita del bulbo olfattivo, della corteccia frontale, dello striato e dell'ippocampo.
- Tecniche dimostrate che preservano l'integrità del tessuto.
- Forniti ausili visivi per migliorare la comprensione del processo di dissezione.
- Evidenziata l'importanza di un'asportazione rapida per evitare il degrado.
Conclusioni
- La micro-dissezione è una tecnica preziosa per la ricerca in neuroscienze.
- Metodi appropriati possono migliorare significativamente la qualità dei campioni di tessuto.
- Queste tecniche possono contribuire allo studio delle malattie neurodegenerative.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Progetto
La microdissezione precisa di regioni cerebrali di ratto consente un'accurata estrazione di RNA e proteine per analisi molecolari successive nella ricerca sulla neurodegenerazione. Tale capacità è fondamentale per la validazione degli obiettivi e la riduzione dei rischi meccanicistici nelle fasi iniziali dei processi di scoperta mirati a meccanismi patologici specifici per regione. Un campionamento regionale affidabile supporta la continuità traslazionale e le decisioni di portafoglio nella scoperta di farmaci per il sistema nervoso centrale.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione del Target
- Permette l'isolamento di regioni cerebrali rilevanti per la malattia al fine di effettuare analisi molecolari.
- Supporta la validazione funzionale dei bersagli collegando cambiamenti specifici della regione alla patologia neurodegenerativa.
- Facilita la riduzione del rischio meccanicistico consentendo test di ipotesi precisi in contesti anatomici definiti.
Sviluppo di Screening e Saggi
- Fornisce campioni di tessuto di alta qualità per lo sviluppo di saggi molecolari riproducibili.
- Garantisce l'integrità di RNA e proteine, supportando letture quantitative in flussi di lavoro successivi.
- Standardizza la preparazione dei campioni, migliorando la comparabilità dei saggi e l'affidabilità dello screening.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Allinea i modelli preclinici alla malattia umana mirando regioni cerebrali omologhe.
- Permette la scoperta e la validazione di biomarcatori in tessuti anatomicamente rilevanti.
- Supporta un avanzamento basato sul rischio fornendo dati molecolari robusti da regioni definite.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Questo protocollo di microdissezione si inserisce all'interfaccia tra la fase iniziale della scoperta e la ricerca preclinica, consentendo analisi molecolari specifiche per regione che guidano la selezione degli obiettivi e la priorizzazione dei composti promettenti.
- Biologia della scoperta: Facilita l'interrogazione basata su ipotesi dei meccanismi neurodegenerativi in regioni cerebrali specifiche.
- Screening: Fornisce campioni standardizzati e ad alta integrità per lo sviluppo di saggi e la valutazione di composti.
- Analisi: Permette la misurazione quantitativa delle variazioni di RNA e proteine attraverso diverse regioni cerebrali.
- Ricerca traslazionale: Collega i risultati preclinici alla rilevanza clinica concentrandosi su regioni coinvolte nella malattia.
- Riutilizzo aziendale: Stabilisce un flusso di lavoro riproducibile per la preparazione dei tessuti applicabile a diversi programmi di ricerca sul sistema nervoso centrale.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Aumenta la fiducia predittiva nei risultati molecolari specifici del territorio.
- Valore operativo: Migliora la riproducibilità e la standardizzazione della lavorazione dei tessuti.
- Valore strategico: Migliora le decisioni di avanzamento o interruzione riducendo l'ambiguità biologica nei percorsi del sistema nervoso centrale.
- Impatto sul portafoglio: Consente la priorizzazione dei bersagli nelle malattie neurodegenerative con adeguamento del rischio.
Considerazioni sull'Implementazione
- Richiede competenze anatomiche per l'identificazione precisa delle regioni e la dissezione.
- Richiede la gestione della catena del freddo e un processamento rapido per preservare l'integrità di RNA e proteine.
- Necessita di protocolli standardizzati per garantire la riproducibilità tra diversi gruppi di lavoro.
- Potrebbe richiedere adattamenti per diversi modelli di roditori o regioni cerebrali.
- Dipende dall'accesso a strumenti specializzati per la dissezione e a infrastrutture per la criopreservazione.
