Name: Modello del mouse completa stasi della vena cava inferiore Trombosi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: Scopri il modello murino di trombosi della vena cava inferiore con stasi completa per studiare la trombogenesi e la risoluzione del trombo. Questo metodo permette di quantificare il tessuto della parete venosa e analizzare l'infiammazione acuta e cronica.

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1. Topo Anestesia Procedure <ol><li> Gli animali vengono rimossi dal loro gabbia e messi in anestesia pre-operatoria camera di induzione per l&#39;induzione di gas al 5% isoflurano e il 100% di ossigeno, ad una portata di 0,5 litri al minuto (vaporizzatore controllato). </li><li> I topi sono sedato nella camera di induzione dell&#39;anestesia, rimosso dalla camera e l&#39;addome ventrale è rasata con cesoie elettriche, o mantenuti all&#39;interno della camera se un depilatorio capelli è usato (1 minuto). </li><li> Mentre ancora sotto sedazione, sono pesati, gli occhi sono lubrificati con pomata oftalmica sterile e quindi posto in un recumbancy dorsale su un acqua calda in circolazione dispositivo di riscaldamento in anestesia generale, con un musetto, con isoflurano e ossigeno. A questo punto il tasso di ossigeno si riduce a 0,2 litri al minuto. </li><li> L&#39;addome viene spruzzato con una soluzione di clorexidina (clorexidina diacetato è rapidamente bacterialcidal e persistente) e si asciugò con garza sterile o tre volte fino a quando il sito chirurgico è pulito. </li></ol> 2. Micro Mouse-chirurgici e procedure di ripristino <ol><li> Una incisione della linea mediana ventrale (2cm) è fatto con le forbici iris attraverso la pelle e la parete addominale esporre l&#39;addome. Una garza sterile imbevuta 2x2in soluzione salina viene utilizzato per riflettere l&#39;intestino alla sinistra dell&#39;animale. Un dispositivo di immobilizzazione mouse è messo in atto a consentire la visualizzazione della vena cava inferiore (IVC). </li><li> A questo punto, un livello di manutenzione del 2% isoflurance e tasso di ossigeno al 100% di 0,2 litri / min viene utilizzato per il resto della procedura chirurgica. </li><li> Dissezione Blunt è facilitato utilizzando un tampone sterile applicatore ed extra delicato tessuto dell&#39;iride pinze mezzo curvo. Bisogna fare attenzione nel maneggiare il mouse per tessuti sono estremamente fragili. Una volta entrati nella cavità addominale, utilizzare una garza sterile imbevuta di soluzione fisiologica 4x4in riflettere e esteriorizzare l&#39;intestino su un telino sterile, permettendo così la visualizzazione della IVC. </li><li> Tutte le filiali indietro IVC, dalle vene renali alla biforcazione iliaca, mentre sono cauterizzato rami laterali sono legatura con 7-0 punti di sutura non reattivi prolene. </li><li> L&#39;IVC è separato dall&#39;aorta, appena inferiore alle vene renali. 7-0 prolene viene usato per legare la IVC. </li><li> Il sito laparotomia è chiuso in due strati di moda. Il nostro laboratorio utilizza Vicryl 5-0, una sutura sintetica, in un modello continuo per chiudere la parete addominale. Colla pelle adesivo utilizzato per chiudere la pelle. Non ci sono suture esterne per la rimozione. </li><li> I topi sono poi recuperati in una gabbia di topo individuale, ha osservato post-operatoria (45 minuti a 2 ore) sotto una lampada riscaldante (distanza minima di-24 cm di distanza dalla gabbia), poi tornati alle loro abitazioni originale. Farmaci antidolorifici e antinfiammatori può essere utilizzato se non interferisce con l&#39;obiettivo di studio. Giustificazione scientifica per trattenere farmaci per il dolore, veterinario, e l&#39;approvazione ICUCA sono necessari. Il nostro laboratorio ha scoperto che la buprenorfina, 0,05-0,1 mg / kg SQ è un analgesico ottimo pre-e post-operatoria per i topi. Inoltre, a 4mg/kg lidocaina (0,4 ml / kg di una soluzione all&#39;1%) può essere infusa nel sito di incisione, quando gli analgesici sistemici possono confondere i risultati sperimentali. </li><li> Sham animali di ogni gruppo sperimentale sottoposto la dissezione sopra utilizzate per l&#39;approccio chirurgico, ad eccezione del IVC o rami di scarico non sono legatura o cauterizzato. </li><li> L&#39;eutanasia è eseguita in conformità con le raccomandazioni stabilite dalla American Veterinary Medical Association Linee guida sull&#39;eutanasia per i roditori. </li></ol>

<ol><li>Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+venous+thrombosis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study.</a> J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).</li>
<li>White, R. H., Keenan, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+race+and+ethnicity+on+the+incidence+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).</li>
<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).</li>
<li>Henke, P. K., Varga, A., De, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombosis+resolution+is+modulated+by+monocyte+CXCR2-mediated+activity+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).</li>
<li>McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+is+associated+with+impaired+thrombus+resolution+in+a+mouse+model+of+stasis+induced+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis.</a> Thromb Res. 125, 72-78 (2010).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+venous+thrombosis+with+an+oral+inhibitor+of+P+selectin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin.</a> J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Completa il modello di mouse Stasi di trombosi vena cava inferiore può essere eseguita su più ceppi di topi di diversa età. Il modello è più adatto ai topi di almeno 20 grammi di peso. Questo modello animale di trombosi venosa permette ai ricercatori di studiare le interazioni tra infiammatorio della parete venosa e del trombo venoso occlusivo. Dalla nostra esperienza, abbiamo scoperto che 10 o più animali per gruppo sono necessari per ottenere una significatività statistica tra i gruppi per i pesi trombo, vena conta de...

<table border="1"><tbody><tr><td> Materiali di consumo e attrezzature </td></tr><tr><td> Gas isoflurano </td></tr><tr><td> Prolene 7-0 sutura </td></tr><tr><td> Vicryl 5-0 sutura </td></tr><tr><td> Colla pelle </td></tr><tr><td> Occhio lubrificante </td></tr><tr><td> Nolvasan soluzione o la soluzione batteriostatica </td></tr><tr><td> Stereomicroscopio portata </td></tr><tr><td> MediCapture </td></tr><tr><td> Cotone Applicatori </td></tr><tr><td> Garza 2x2 </td></tr><tr><td> Riscaldamento pad </td></tr><tr><td> Anestetico macchina </td></tr><tr><td> Perle di vetro strumento sterilizzatore </td></tr><tr><td> Micro strumenti chirurgici </td></tr><tr><td> Restrainers addominale </td></tr></tbody></table>

modello del mouse completa stasi della vena cava inferiore trombosi

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Tromboembolismo venoso (TEV) comprende sia la trombosi venosa profonda (TVP) ed embolia polmonare (EP). Negli Stati Uniti (US), l&#39;alta morbilità e mortalità tassi di TEV fare un serio problema di salute 1-2. Dopo le malattie cardiache e ictus, tromboembolismo venoso è il terzo 3 più comuni malattie vascolari. Solo negli Stati Uniti, c&#39;è un circa 900.000 persone colpite ogni anno, con 300.000 decessi che si verificano ogni anno 3. Un affidabile in un modello animale in vivo per studiare i meccanismi di questa malattia è necessario. I vantaggi di utilizzare il modello murino completa stasi di trombosi della vena cava inferiore sono diversi. Il modello del mouse permette la somministrazione di volumi molto piccoli di agenti limitata disponibilità di test, riducendo i costi drasticamente. Più promettente è la possibilità di topi con knockout gene che permettono funzioni specifiche fattore infiammatorio e della coagulazione a delinearsi. Attuali test molecolare consentono la quantificazione di parete venosa, trombi, sangue intero e plasma per saggi. Tuttavia, una delle maggiori preoccupazioni che coinvolgono questo modello è il limitare la dimensione operativa e la friabilità dei vasi. Inoltre, a causa del piccolo peso campione IVC (media 0,005 grammi), è necessario aumentare il numero degli animali per l&#39;accurata analisi statistiche per il tessuto, trombo, e saggi di sangue come real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), Western Blot, enzyme-linked immunoenzimatico (ELISA), zimografia, parete venosa e trombosi analisi cellulare e sangue intero e plasma saggi 4-8. Il principale svantaggio con il modello di stasi è che la mancanza di flusso di sangue inibisce l&#39;effetto massimo di somministrare agenti terapeutici sistemici sul trombo e la parete venosa.

L&#39;intero modello murino stasi di trombosi della vena cava inferiore rendimenti quantificabile quantità di tessuto della parete venosa e trombosi. Si è dimostrato utile per valutare le interazioni tra la parete venosa e il trombo occlusivo e nel valutare la progressione da acuta a cronica.

Modello del mouse completa stasi della vena cava inferiore Trombosi

Il tromboembolismo venoso (TEV) comprende sia la trombosi venosa profonda (TVP) che l'embolia polmonare (EP). Negli Stati Uniti (U.S.), l'elevata morbilità e...

L'obiettivo generale di questa procedura è legare la vena cava inferiore (IVC), provocando una stasi completa che porta alla formazione di un trombo, al fine di studiare la trombogenesi e la sua risoluzione. Questo viene ottenuto esponendo innanzitutto l'IVC mediante un'incisione mediana ventrale. Successivamente, tutti i rami laterali e posteriori di drenaggio vengono individuati e cauterizzati o legati. Successivamente, la vena cava inferiore viene separata dall'aorta al di sotto delle vene renali e legata. Infine, la vena cava inferiore e il trombo vengono prelevati in diversi momenti temporali per la valutazione molecolare. In definitiva, si possono ottenere risultati che mostrano il grado di carico trombotico fino al sesto giorno.Il modello murino di legatura della vena cava inferiore è stato sviluppato nel nostro laboratorio per lo studio di topi con geni eliminati. La dimostrazione visiva di questo modello chirurgico è fondamentale poiché i passaggi procedurali sono difficili da apprendere a causa delle tecniche microchirurgiche necessarie per eseguire questo protocollo. Per iniziare, anestetizzare l'animale in una camera di induzione anestetica preoperatoria con isoflurano al 5% e ossigeno al 100% a una portata di 0,5 litri al minuto.Rimuovere l'animale dalla camera, posizionarlo supino e rasare l'addome ventrale con un rasoio elettrico. Successivamente, pesare l'animale. Quindi, lubrificare gli occhi con un unguento oftalmico sterile.Posizionare l'animale in posizione supina su un tappetino riscaldante a circolazione di acqua calda, sotto anestesia generale con isoflurano e ossigeno. Spruzzare l'addome con soluzione di clorexidina e detergere con garza sterile. Disinfettare l'addome fino a quando il sito chirurgico risulti pulito per iniziare l'intervento chirurgico.Utilizzando forbici da iridectomia, praticare un'incisione mediana ventrale attraverso la cute e la parete addominale, esponendo l'addome con garza sterile inzuppata di soluzione fisiologica. Deviare gli intestini dell'animale verso il suo lato sinistro. Utilizzare un contenitore per mouse per esporre la vena cava inferiore (IVC).A partire da questo passaggio e per il resto dell'intervento chirurgico, mantenere l'anestesia con isoflurano al 2%, ossigeno al 100% a una portata di 0,2 litri al minuto. Utilizzando un bastoncino sterile di cotone e pinzette delicate per tessuti dell'iride, eseguire una dissezione ottusa della fascia addominale per esporre la vena cava inferiore e tutti i suoi rami.Prima cauterizzare tutti i rami collaterali della VCI dai renali alla biforcazione iliaca. Quindi legare i rami laterali con sette suture di prolene non reattive. Separare la VCI dall'aorta appena al di sotto delle vene renali.Utilizzare suture di prolina 7-0 per legare la vena cava inferiore. Chiudere la parete addominale utilizzando suture sintetiche Vicryl 5-0. Quindi applicare una colla adesiva per cute per chiudere l'epidermide.Monitorare l'animale in una gabbia di recupero sotto una lampada riscaldante, quindi restituire l'animale al suo contenitore originale. Questa analisi confronta topi di controllo e animali sottoposti alla legatura dell'IVC e trombosi al momento dell'eutanasia. Al secondo o al sesto giorno, il trombo dell'IVC e la parete venosa ad esso associata sono stati rimossi e pesati.La misurazione del peso del trombo consente all'investigatore di documentare il grado di trombosi e il suo grado di risoluzione nel tempo. È un indicatore dell'evento infiammatorio associato all'attivazione delle cellule endoteliali. La misurazione rappresenta inoltre un'indicazione utile dell'efficacia di un agente terapeutico nel ridurre l'infiammazione e la quantità di trombo nella parete venosa. Qui, la vena cava inferiore insieme all'aorta è stata rimossa.Sezione in paraffina montata su vetrini e colorata con ematina ed eosina. Questo grafico rappresenta il numero di cellule polimorfonucleari o PMN nei tessuti di topi di controllo rispetto a topi sperimentali. La misurazione delle popolazioni di cellule infiammatorie nella parete venosa viene utilizzata per documentare la risposta infiammatoria naturale, da acuta a cronica, nella parete venosa in presenza di trombi venosi in un animale normale; una risposta infiammatoria acuta al secondo giorno dovrebbe essere prevalentemente costituita da neutrofili.Come indicato in questa figura, in assenza di infezione, la popolazione di neutrofili nella parete venosa dovrebbe diminuire dopo il secondo giorno. Nel nostro modello murino di trombosi venosa. Qui viene confrontato il numero di monociti nella parete venosa.Una risposta infiammatoria della parete venosa più subacuta e cronica mostrerà un aumento. Nelle popolazioni di monociti della parete venosa, i monociti secernono enzimi proteolitici, che si è dimostrato promuovono la risoluzione naturale del trombo venoso. Col tempo, in assenza di infezione, da questo video dovreste ora avere una buona comprensione di come eseguire il nostro modello di legatura della VCI.Questo modello è ottimo per lo studio della trombogenesi e della risoluzione del trombo nel tempo.

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