Name: 実験用ラットとマウスにおけるエクト - とEndoparasitesの診断 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: 学ぶ実験用ラットとマウスの寄生虫診断法。被毛・皮膚検査、糞便浮遊法、剖検後の腸内容物採取による内寄生虫・外寄生虫の検出手法を解説。研究動物の健康管理と正確な同定技術を習得できます。

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<ol><li>Baker, D. G. Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+DG+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Diseases Vol. 2, Academic Press. (2007).</li>
<li>Baker, D. G. Chapter 11. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+DG+%22Flynn%27s+Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Flynn's Parasites of Laboratory Animals</a>. Baker, D. G. , Blackwell. 303-398 (2007).</li>
<li>Owen, D. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOwen%2C+DG+%22Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Parasites of Laboratory Animals</a>. 12, Royal Society of Medicine. (1992).</li>
<li>Pritchett, K. R. Chapter 22. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPritchett%2C+KR+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Diseases Vol. 2, Academic Press. (2007).</li>
<li>Smith, P. H., Wiles, S. E., Malone, J. B., Monahan, C. M. Chapter 1. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSmith%2C+PH+%22Flynn%27s+Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Flynn's Parasites of Laboratory Animals</a>. Baker, D. G. , Blackwell. 1-13 (2007).</li>
<li>Wasson, K. Chapter 21. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWasson%2C+K+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Vol. 2, Academic Press. 517-550 (2007).</li>
</ol>

著者らは、上記のテストを含むチャールズリバー、診断テストや試薬の供給者、すべての従業員です。

実験室で作業する場合、安全性は常に問題になるはず。動物を扱う場合に適切な保護具を着用すると前と後の消毒薬を使用してワークステーションを清掃することを忘れないでください。これらのメソッドは、主に、すなわちを検討し、彼らはエキゾチックなまたは非常に稀寄生虫だけでなく、より一般的な蟯虫と毛皮のダニを検出できる場所に実験用げっ歯類のいずれかの寄生虫を見つけるために設計されています。彼らは他の種にも等しく適用可能であるが、野生のげっ歯類は、上記の方法で評価されない、などの肝臓、皮下組織、脳などの場所で追加の寄生虫があるかもしれません。

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬名 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>まな板</td><td>サーモエレクトロンコーポレーション</td><td>猫＃36114 </td><td></td></tr><tr><td>小さなはさみ</td><td> ROBOZ </td><td> RS - 5910、G204 </td><td> 23ミリメートルブレード、3.5&quot;長さ、ストレート</td></tr><tr><td>培地はさみ</td><td> ROBOZ </td><td> RS - 6808、G207 </td><td> 5&quot; </td></tr><tr><td>鉗子に湾曲した</td><td> ROBOZ </td><td> RS - 8254（M1/21004） </td><td> 4.5&quot;、鋸歯状、わずかな曲線</td></tr><tr><td>鉗子- Microdissecting </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 5238 </td><td>ハドソン-（エーヴァルト） </td></tr><tr><td>鉗子 - 組織鉗子</td><td> ROBOZ </td><td> RS - 8160 </td><td>ラットの歯</td></tr><tr><td>金属プローブ</td><td> VWR </td><td>猫＃25778-000 </td><td></td></tr><tr><td>止血</td><td>有利</td><td> V97 - 48 </td><td></td></tr><tr><td>アプリケータースティック</td><td>ピューリタン</td><td> 6インチアプリケーター、参照番号807 </td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> SZ51、ショット、ACE1 </td><td></td></tr><tr><td>ペトリ皿</td><td> VWR </td><td> 100ミリメートル、猫＃3401PDNL </td><td></td></tr><tr><td>カバースリップ</td><td> VWR </td><td>マイクロカバーガラス、猫＃48366から067 </td><td></td></tr><tr><td>スライド</td><td> VWR </td><td> VistaVisionの顕微鏡スライドの猫＃16004から368 </td><td></td></tr><tr><td>接種ループ</td><td> VWR </td><td>猫＃50815-040 </td><td></td></tr><tr><td>光顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td>モデル＃BX41TF </td><td></td></tr><tr><td>実験室のオーブン</td><td>クインシーラボ株式会社</td><td>モデル10研究室のオーブン</td><td></td></tr><tr><td>遠心</td><td>ベックマンコールター</td><td>アレグラX - 12R </td><td></td></tr><tr><td>ボルテックス</td><td> VWR </td><td>ミニボルテックス</td><td></td></tr><tr><td>テストチューブ</td><td>キンブル=チェイス</td><td> 15ミリリットルディスポーザブル遠沈管、カタログ番号73790〜15 </td><td></td></tr><tr><td>カバースリップ</td><td> VWR </td><td>プラスチック製の顕微鏡のカバーガラス、22ミリメートル、カタログ番号48376から049 </td><td></td></tr><tr><td>ホワイトキャップ</td><td> VWR </td><td>猫＃60869-089 </td><td></td></tr><tr><td>ヨウ素</td><td>ローリー生化学研究所</td><td>猫＃SO - 364 </td><td></td></tr><tr><td>亜鉛硫酸</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>猫＃1000917519、Z4750 - 500G </td><td></td></tr><tr><td>スクロース</td><td> Mallinckrodtケミカルズ</td><td>猫＃8360〜06 </td><td></td></tr><tr><td>フェノール</td><td> EMD </td><td>猫＃PX0510 - 1 </td><td></td></tr><tr><td>セロハンテープ</td><td>ステープルズ</td><td>目に見えないテープ、猫＃504712 </td><td></td></tr><tr><td>鉱油</td><td> Mallickrodt </td><td>猫＃6358 </td><td></td></tr></tbody></table>

実験用ラットとマウスにおけるエクト - とendoparasitesの診断

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

内部および外部寄生虫は、実験室のげっ歯類の施設で重要な心配の種である、と多くの研究施設は、いくつかの寄生動物を抱く。寄生虫の動物の調査に着手する前に、二つのことを考慮する必要があります。 One：何を使用すると、収集した情報で作られ、二つになります：どのテストが最も適切です。動物は寄生されていることを知ることは、施設を受け入れるが、動物の治療にして、治療の有効性を判断する必要がしばしばあることなのかもしれません。寄生虫は、ライブまたは安楽死させた動物から採取したサンプルを含む様々な技術を通じて、動物で検出されることがあります。 PCRは、寄生虫のいくつかのタイプのための高感度のテストを許可しているものの、歴史的に、最大の診断感度テストでは、動物の安楽死を必要とした。この記事はの検出エンドおよびマウスとラットにおける外部寄生虫のための手順を示しています。見つかった寄生虫の種類が異なりますが、同様の手順では、他のげっ歯類にも適用可能である。

この記事ではendo -または外部寄生を検出するスクリーニングのラットとマウスの様々な手順を説明します。いくつかの診断アッセイが実証され、生きた動物での使用に適したものと動物の安楽死の後に使用されているもの両方。ラットとマウスの寄生虫の同定に役立つように写真が含まれます。

実験用ラットとマウスにおけるエクト - とEndoparasitesの診断

実験動物施設における内部寄生虫および外部寄生虫は、依然として重大な懸念事項であり、多くの研究施設において、寄生虫に感染した個体が飼育されています。

この手順の全体的な目的は、実験用ラットまたはマウスに寄生虫が存在するかどうかを判定することです。これは、被毛の検査、糞便の検査、および腸内容物の検査を含む、さまざまな方法で達成できます。最終的に、これらの検体を定期的に検査することで、コロニー全体の健康状態に関する重要な情報を得ることができます。これらの手法を徹底的かつ注意深く行わない場合、寄生虫感染を見逃す可能性があるため、視覚的な実演が極めて重要になります。一般的に、これらの手法に不慣れな人は、たとえ手技が正しく行われたとしても、寄生虫を誤認することがあるため、習得に苦労することがあります。今回実演する手法は、研究に使用されるラットやマウスの健康状態に関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。被毛および肛門周囲のサンプルを採取する前に、動物1匹につき少なくとも2枚のガラススライドを用意し、ミネラルオイルを数滴滴下しておきます。対象のマウスをケージから持ち上げ、逆さまにしたケージ蓋の内側に置きます。尾を持って固定します。マウスの会陰部および肛門周囲に、5 cmのセロハンテープをしっかりと貼り付けます。成功すれば、テープに被毛が付着します。そのまま動物を保定し、ピンセットで被毛を掴みます。肩甲骨領域、頚部腹側、腋窩、鼠径部、および臀部背側から、被毛サンプルを優しく抜き取ります。これらのサンプルを5 cmのセロハンテープに貼り付けます。各サンプルを採取するたびに、テープの粘着面を下にしてスライドガラスに貼り付けます。すべてのサンプルの採取が完了したら、各サンプルの上に鉱物油をさらに1滴滴下し、カバーガラスを被せます。肛門周囲の検体スライドを鏡検する際、Taenia saginata以外の寄生虫の卵が見つかる可能性は低いです。糞便検査では、各個体またはケージから2〜5個のペレットを採取します。サンプルが極端に乾燥している場合は、500 µLの0.9% salineで湿らせてください。サンプルを10 mLのピル瓶または糞便浮遊装置に入れます。回収用バイアルをシャーレに置き、バイアルの4分の1まで高比重浮遊液を満たします。次に、大きな塊がなくなるまで、糞便をバイアル内の溶液にすり潰しながら混ぜ合わせます。バイアルの縁にメニスカスが形成されるまで、浮遊液を加え続けます。次に、カバーガラスをメニスカスの上に置き、バイアルを室温で15分間インキュベートします。インキュベーション中に、寄生虫、虫卵、プロテアソームおよびオアシスが浮上してカバーガラスに付着し、その後、さらに検討するためにスライドガラスにマウントされます。このアッセイは、ピルバイアルのような簡便な容器を用いて実施することが可能です。冷凍保存されていない場合は、まず動物1頭あたり2〜10個の糞便ペレットを回収し、乾燥している場合は500 µLの0.9%生理食塩水で再水和させます。15 mLのガラス製遠心チューブの4分の1まで高密度浮遊液を満たし、サンプルを混合します。ガラスチューブをプラスチック製のスナップキャップで蓋し、混合液が均一な外観になるまで15〜30秒間ボルテックスします。次に、各サンプルチューブに浮遊液を追加します。わずかに凸状のメニスカスを形成させてください。各チューブにプラスチック製カバーガラスを被せ、チューブの縁に完全に密着していることを確認します。最適な密封状態にするため、綿棒でチューブを清掃します。次に、チューブとカバーガラスを遠心分離し、回転後に10分間静置します。カバーガラスの紛失や破損があった場合は、新しいものと交換し、チューブをゆっくりと傾けて、液面（メニスカス）が新しいカバーガラスに接触するようにしてください。次に、すべてのカバーガラスを取り除き、ラベルを貼った清潔なガラス製顕微鏡スライドに置きます。麻酔下または安楽死させた動物におけるシストの同定には、ヨウ素染色が有用です。尾の付け根付近の背側の被毛、頭部の側頭領域、あるいは皮膚病変部位やその他の掻爬予定部位の被毛を刈り取り、スカルペルを用いて毛の流れとは逆方向に皮膚を深く掻爬します。これにより表皮が除去されます。ラベルを貼ったスライドガラスに塗布したミネラルオイルでブレードを拭き取ります。必要に応じて、オイルをさらに1滴加えます。サンプルをガラスカバースリップで覆う前に、安楽死させた動物を清潔な解剖板の上に置き、ピンセットを用いて生殖器付近の腹壁を持ち上げます。次に、ハサミを用いて生殖器付近から肋骨の基部まで腹側腹壁を慎重に切開し、皮膚と筋肉を除去して腸管を露出させます。その後、盲腸と十二指腸の一部をペトリ皿の蓋に回収します。各腸管セグメントを縦方向に切開します。粘膜を露出させるため、ラベルを貼ったスライドガラス1枚に0.9%生理食塩水を2滴滴下します。次に、滅菌済みの白金耳を用いて十二指腸の粘膜を掻き取り、その掻爬物を生理食塩水1滴の中に置きます。この工程を繰り返し、盲腸から別のドロップへサンプルを移します。残りの腸管を取り除きます。十二指腸から始めて、下行結腸まで続けます。腸を100 mLのシャーレの底に移します。はさみを使用して、腸を小さく切断します。採取した組織がわずかに浸る程度の水道水をシャーレに加えます。試料混合液を35～40 °Cで最低10分間インキュベートします。これにより、すり潰した腸管試料のインキュベート中に、管腔内のヘルメットが放出され、露出します。位相差顕微鏡を用いて、十二指腸およびSQL試料に寄生虫が存在するか確認してください。腸管サンプルの全量におけるインキュベーションが完了した後、解剖顕微鏡でディッシュの内容物を観察します。プローブを用いて、詳細に検査してください。ぎょう虫は、小さな白い毛のような虫として観察されます。サナダムシは、分節した扁形動物として観察されます。虫体または疑わしい物質があれば、小型ピンセットで回収し、スライドガラスに封入します。光学顕微鏡でさらに詳しく調べるには、安楽死させたマウスまたはラットを解剖顕微鏡のステージに直接置き、10倍の対物レンズで、アプリケータースティックを用いて被毛を分けながら、毛幹の基部を観察します。外部寄生虫は、フケのように見えたり、毛幹の基部または皮膚に直接、黄色いワックス状の蓄積物として現れたりすることがあります。少なくとも、頭部、鼠径部、および腋窩において外部寄生虫の有無を確認してください。小型ピンセットを用い、眼の間、耳の間、肩甲骨の間、および下顎の下を注意深く確認します。外部寄生虫の可能性があるものや、その他の疑わしい物質をスライドガラスに回収します。同定のためにミネラルオイルで封入します。これらの手順により、多くの一般的な寄生虫が検出されます。以下にいくつかの例を挙げます。これらは会陰テープ検体から見つかったSE顔面卵です。糞便遠心分離調製物から、ダニのmyopia musculiが含まれていることが判明しました。これらはpicis tetterの卵です。腸粘膜の直接鏡検において、trioniが観察されることがあります。浸軟させた腸管の検査により、これらの成虫のギョウチュウが明らかになりました。習得すれば、この完全な寄生虫検査は1時間以内に完了させることができます。このビデオを視聴することで、ラットおよびマウスにおけるさまざまな寄生虫検査の実施方法について十分に理解できるはずです。これらの寄生虫の一部はヒトに感染する可能性があることに注意してください。常に基本的な実験室の安全規則に従ってください。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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