Name: 연구실 고양이와 마우스에 외부의 뜻과 Endoparasites의 진단 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: 학습하세요 실험실 쥐와 생쥐의 기생충 진단 방법을 배우세요. 털과 피부 검사, 분변 검사, 장 내용물 분석을 통해 기생충을 효과적으로 탐지하고 동물 군집의 건강 상태를 평가하는 기술을 익히세요.

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1. Endoparasite 시험 (표 1) 1. 음부 테이프 테스트 (또한 섹션 5를 참조하십시오, 이들은 보통 동시에 수행됩니다) <ol><li> 디스펜서에서 맑은 길이 아니 프로스트, 셀로판 테이프를 제거합니다. 테이프의 중간 (약 5cm)을 만지하지 않고 한쪽으로 충분히 처리할 수 있어야합니다. 그것은 깨끗한 작업 표면의 가장자리에 부착하고 필요에 따라 사용하여 한 번에 여러 개의 길이를 분배하는 것이 더 쉽습 수 있습니다. </li><li> 꼬리하여 잡고 케이지 뚜껑에 미치는 케이지 장소에서 마우스를 들어 봐요. 층류 흐름 캐비닛이나 동물의 건강 상태가 그것을 요​​구하는 경우 biosafety 캐비닛에서이 작업을 수행합니다. </li><li> 케이지에서 뒷다리 리프팅, 꼬리로 마우스를 구속. 엄지와 집게손가락 사이에 테이프의 끝 부분을 파악 후 음부 지역 여러 번 포함 단단히 마우스의 회음부에 테이프의 가운데를 적용합니다. 머리를 성공적으로 고려하는 분석을위한 테이프에 자기편으로 볼 수 있습니다. </li><li> 새장에 마우스를 다시 넣으십시오. </li><li> 표시 깨끗한 유리 슬라이드에 미네랄 오일 한 방울을 플레이스, 미네랄 오일의 다른 드롭 다음, 슬라이드에 테이프를 적용해야합니다. 유리 커버 전표로 커버. </li><li> 가벼운 현미경에 10X와 40x 목표를 사용하여 현미경 슬라이드를 참조하십시오. 다른 기생충 알이 발견 가끔 있지만 음부 테이프 시험은, Syphacia의 계란을 검출에 가장 적합합니다. </li></ol> 2. 방패 선법 <ol><li> 부양 솔루션 평면 바닥 유리병 (예 : Ovatector 같은 알약의 약병이나 배설물 부양 장치), 페트리 접시, 커버 슬립, 현미경 슬라이드 및 작은 주걱 / 감동 빨대를 조립. 같은 Fecasol 같은 부양 솔루션, 1.20-1.30의 비중이 있어야하고 다양한 나트륨 소금, 설탕, 황산 아연, 또는 상업적으로 구입에서 만들 수 있습니다. (표 2) </li><li> 부양 챔버에 2-5 배설물은 새장에서 알약이나 동물 (S)에서 신선한를 수집합니다. 배설물은 0.9 %의 식염수 500 μl로 대변을 moistening 매우 건조 중 연령이나 대변을 생산 수종에 의한 경우에는 도움이 될 수 있습니다. </li><li> 녹아 대소변의 오버플로에서 작업 표면을 보호하기 위해 배양 접시에있는 병을를 놓습니다. 부양 매체와 매시의 작은 볼륨을 추가하고 철저 저어. 자료 없음 대형 조각 남아해서는 안됩니다. 유리병의 가장자리 위에 초승달 모양의 형태까지 부양 미디어를 추가로 진행합니다. </li><li> 초승달 모양에 커버 슬립을 놓고 15 분 동안 상온에서 알을 품다. 기생충 알 및 일부 protozoan의 oocysts은 정상에 오르는 및 커버 슬립을 준수합니다. </li><li> 부화 후, 리프트와 커버 슬립을 반전. 유리 현미경 슬라이드에 커버 슬립을 놓습니다. </li><li> 가벼운 현미경 10X와 40x 목표를 사용하여 슬라이드를 검사합니다. </li><li> 낮은 기술하고 쉬운가 일반적으로 수행하지만,이 기술은 마우스 또는 쥐 권장하지 않습니다. 원칙적으로, 그것은 대소변의 큰 볼륨을 생산 동물에 대한 더 적합합니다. </li></ol> 3. 방패 농도 및 원심 분리 <ol><li> 부양 솔루션, 원심 분리기 튜브, 커버 슬립, 현미경 슬라이드 및 작은 주걱 / 교반 막대기 및 관 뚜껑을 조립. 부양 솔루션은 1.18-1.30의 비중이 있어야하고 다양한 나트륨 소금, 설탕, 황산 아연, 또는 상업적으로 구입에서 만들 수 있습니다. (표 2) </li><li> 컬렉션 튜브에 20-10 배설물은 새장에서 알약이나 동물 (S)에서 신선한를 수집합니다. 배설물은 식염 0.9 % 500 μl 또는 부양 솔루션의 대소변을 moistening 매우 건조 중 연령이나 대변을 생산 수종에 의한 경우 사용하는가 도움이 될 수 있습니다. </li><li> 유리 원심 분리기 튜브 내에 적절한 부양 용액에 샘플을 섞는다. vortexer와 기계 교반은 샘플을 혼합하는 데 사용할 수 있습니다. vortexer를 사용하는 경우, 스냅 모자는 spillage 및 교차 오염을 방지하기 위해 튜브의 꼭대기에 위치해야합니다. 일상적으로, 샘플은 그러나 다른 솔루션 이외에 사용 (별도 준비 튜브) 또는 대체에있을 수 있습니다, 비중 1.18의 황산 아연에 준비가되어 있습니다. </li><li> 각각의 튜브에 약간의 긍정적인 초승달 모양을 형성하기 위해 각 튜브에 추가 부양 솔루션을 추가합니다. 각각의 튜브에 플라스틱 커버 슬립을 적용하고, 튜브 입술 전체에 연락이 만들어 있는지 확인합니다. 장소 튜브 (S) 원심 분리기로. </li><li> 10 분 약 616-760 RCF에서 원심 분리기. 커버 전표를 분실하거나 원심 분리 과정에서 깨진 경우, 새로운 커버 슬립이 샘플 튜브에 배치 수 있으며 튜브가 부드럽게 초승달 모양이 새로운 커버 슬립을 건드리면 너무 밀고 수 있습니다. 추가 원심 분리가 필요하지 않습니다. </li><li> 라벨 깨끗한 유리 현미경 슬라이드에 원심 분리기 튜브의 슬립과 장소를 커버 제거합니다. 여러 개의 원심 분리 솔루션 하나의 배설물 샘플을 평가하는 데 사용했다면, 두 커버 전표가 같은 슬라이드에 추가할 수 있습니다. </li><li> 요오드와 슬라이드를 얼룩. 이것은 E에 대한 수cysts의 asier 식별. </li><li> 가벼운 현미경에 10X와 40x 목표를 사용하여 슬라이드를 검사합니다. </li></ol> 4. 직접 helminths에 대한 창자의 시험 및 원생 동물문 <ol><li> 깨끗한 절개 보드 또는 이와 유사한 작업 표면에 지느러미 드러누움에 euthanized 마우스 또는 쥐 시체를 놓습니다. </li><li> 포셉 사용하여 성기 영역에서 복부 벽에 리프트. 가위를 사용하여 조심스럽게 성기 지역에서 피부와 근육을 모두 제거하고 장의 위치를​​ 노출 ribcage의 기본으로 복부 복벽을 절개. 십이지장에서 시작 (복부의 출구에 대장의 시작의 세그먼트)과 내림차순 콜론 (항문에서 끝나는 주로 형성 대변이 들어있는 소장의 세그먼트)에 계속, 장내를 제거합니다. </li><li> 100 ML 배양 접시에있는 장소 내장. 해부 보드에 euthanized 동물과 장소에서이게 맹장과 십이지장의 일부를 수집합니다. 점막을 폭로 세로 각 장의 세그먼트를 절개. </li><li> 가위를 사용하여 작은 부분으로 남아있는 장내를 잘라. 간신히 잠수함 수집한 조직을 위해 요리에 충분한 수돗물을 추가합니다. </li><li> 35-40 ° C에서 10 분 최소 실험실 오븐이나 인큐베이터에서 샘플 혼합물을 품어. 이것은 해방과 luminal helminths를 노출합니다. 샘플 잠복기지만, 다음 단계를 수행합니다. </li><li> 두 개 창자 세그먼트 (십이지장과 맹장)에서 시료의 준비 있도록 단일 레이블 슬라이드에서 나란히 0.9 % 생리 측면의 두 방울. </li><li> 소독 열과 inoculating 루프 또는 이와 동등한 진정해. </li><li> 십이지장의 점막을 다쳤고, 그리고 슬라이드 (프로스트의 가장자리에 가장 가까운 쪽)의 왼쪽에있는 부스러기를 놓습니다. </li><li> 이게 맹장의 점막을 긁어와 슬라이드의 오른쪽부터 부스러기를 놓습니다. </li><li> 커버 전표와 부스러기를 위로. 위상 대비 현미경 40x 목표를 사용하여 준비 슬라이드를) 검사, 식별을위한 필요에 따라 증가 확대. 기생충이 발견하는 경우, 형태학을 기반으로 식별합니다. </li><li> 요리 내용이 시점에서 시험을 준비합니다. 해부 현미경 접시 내용을 검사합니다. 철저한 검사를 완료 접시 안에 내용을 이동하는 필요에 따라 프로브 또는 작은 주걱 스틱을 사용합니다. pinworms가 존재하는 경우 그들은 작은, 백색, 머리와 같은 벌레로 나타납니다. 촌충이있는 경우, 그들은 세그먼트, 평면 웜 (스레드와 같은 pinworms보다 큰)로 표시됩니다. </li><li> helminths이 감지하거나 의심하는 경우, 포셉의 작은 쌍을 사용하여 표본을 수집합니다. </li><li> 파라핀이나 미네랄 오일 한 방울의 표시, 깨끗한 유리 슬라이드 표본을 탑재하고 시편 위에 커버 전표를 놓습니다. 가벼운 현미경에 10X와 40x 목표를 사용하여 슬라이드를 검사합니다. </li></ol> 2. Ectoparasite 시험 (표 3) 5. 모피는 ectoparasites 시험 (테이프 테스트)를 뽑다 <ol><li> 디스펜서에서 맑은 길이 아니 프로스트, 셀로판 테이프를 제거합니다. 테이프의 중간 (약 5cm)을 만지하지 않고 한쪽으로 충분히 처리할 수 있어야합니다. 그것은 깨끗한 작업 표면의 가장자리에 부착하고 필요에 따라 사용하여 한 번에 여러 개의 길이를 분배하는 것이 더 쉽습 수 있습니다. </li><li> 꼬리하여 잡고 케이지 뚜껑에 미치는 케이지 장소에서 마우 스나 쥐가 들어 봐요. 층류 흐름 캐비닛이나 동물의 건강 상태가 그것을 요​​구하는 경우 biosafety 캐비닛에서이 작업을 수행합니다. </li><li> 마우스 또는 쥐을 억제. hemostats와 모피를 파악하고 부드럽게 마우스의 견갑골 구역, 복부 자궁 지역, 겨드랑 지역, 사타구니 주변, 그리고 지느러미 엉덩이에서 모피를​​ 뽑다. 테이프에 모피를 놓습니다. 머리를 성공적으로 고려하는 분석을위한 테이프에 자기편으로 볼 수 있습니다. 그 새장에 마우스 또는 쥐를 다시 넣으십시오. </li><li> 표시 깨끗한 유리 슬라이드에 미네랄 오일 한 방울을 플레이스, 미네랄 오일의 다른 드롭 후, 테이프를 적용합니다. 유리 커버 전표로 커버. </li><li> 가벼운 현미경 10X와 40x 목표를 사용하여 현미경 슬라이드를 참조하십시오. </li><li> 이 시험은 Radfordia, Myobia 및 Myocoptes 같은 모피 진드기 검출에 가장 적합합니다. </li></ol> 6. 스킨 다쳤어요 <ol><li> 다음 자료 소집해 : 동물 테스트로, 미네랄 오일, 현미경 슬라이드, 커버 슬립, 메스와 가위. 이 테스트는 살아있는 동물에서 수행되어야하는 경우, 그들은 시작하기 전에 anesthetized해야합니다. </li><li> 꼬리와 머리의 관자놀이의 기본 근처 dorsum를 드셔보세요. 또한, 피부 병변 및 / 또는 기타 사이트 까진 수 있습니다. </li><li> 깊이 표피를 침식하는, 헤어 성장의 반대 방향으로 메스 칼날로 피부를 다쳤어요. 근근이 살아가고하기 전에 헤어 코트를 트리밍하면에 시각적 방해 (초과 머리)를 줄임으로써 심사의 감도를 향상시킬 수 있습니다슬라이드. </li><li> 슬라이드에 기름 한 방울을 넣으십시오. 슬라이드의 표면에 날개를 (샘플 첨부)를 닦는하여 오일 드롭 샘플을 적용합니다. 필요한 경우 슬라이드와 커버 슬립과 함께 가기에 추가 기름을 추가합니다. </li><li> 가벼운 현미경 10X와 40x 목표를 사용하여 현미경 슬라이드를 참조하십시오. </li><li> 피부 다쳤어요는 일반적으로 Demodex (및 dermatophytic 곰팡이) 감지하는 데 사용됩니다. </li></ol> 7. 털가죽의 직접 검사 <ol><li> 해부 현미경의 무대에 euthanized 마우스 또는 쥐를 놓습니다. </li><li> 일부 머리를 작은 주걱 스틱 또는 유사한 악기를 사용하여 약 10X에 펠트의 머리카락을 검사하고 머리 축의 기반을 관찰합니다. </li><li> 눈과 pinnae, pinnae 사이 scapulae 사이의 턱 아래, 그리고 사타구니와 겨드랑 지역 사이의 두개골 영역을 검사합니다. 또는, 전체 시체는 검사 수 있습니다. </li><li> 모든 ectoparasites 또는 포셉의 작은 쌍을 사용하여 본 의심스러운 자료를 수집합니다. Ectoparasites은 종종 비듬이나 머리카락 샤프트의 기본 또는 직접 피부에 노란 밀랍 상승 것처럼 보일 수 있습니다. </li><li> 파라핀이나 미네랄 오일 드롭 깨끗한 유리 슬라이드 표본을 탑재하고 시편 위에 커버 전표를 놓습니다. 가벼운 현미경 10X와 40x 목표를 사용하여 슬라이드를 검사합니다. </li></ol> 3. 대표 결과 : 다음과 같은 기생충을 식별 첨부 파일을 참조하십시오 (참고 : 다음 절차는 대변이나 피부와 모피에있는 모든 계란, 기생충, 또는 낭종 선물을 감지, 이들 중 몇은 다음과 같습니다) Endoparasites : <table border="0"><tbody><tr><td> Syphacia muris (계란, 웜) </td><td> Chilomastix bettencourti </td></tr><tr><td> Syphacia obvelata (계란, 웜) </td><td> Hexamastix muris </td></tr><tr><td> Aspiculuris tetraptera (계란, 웜) </td><td> Retortamonas SP. </td></tr><tr><td> Rodentolepis 나나 (계란, 웜) </td><td> Giardia 종. </td></tr><tr><td> Tritrichomonas muris </td><td> Spironucleus muris </td></tr><tr><td> Entamoeba muris </td><td></td></tr></tbody></table> Ectoparasites : <table border="0"><tbody><tr><td> Myocoptes musculinis </td><td> Radfordia affinis </td></tr><tr><td> Myocoptes musculinis </td><td> Radforida ensifera </td></tr><tr><td> Myobia musculi </td><td></td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td>&nbsp;</td><td> 테이프 테스트 </td><td> 방패 선법 </td><td> FCC </td><td> 직접 시험 1 </td><td> PCR </td></tr><tr><td> 원생 동물문 </td><td> - </td><td> + </td><td> + + </td><td> + + + </td><td> + + + / NA 2 </td></tr><tr><td> Metazoa </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pinworm </td><td> + / - 3 </td><td> + / - 4 </td><td> + 4 </td><td> + + + </td><td> + + + </td></tr><tr><td> 촌충 5 </td><td> - </td><td> + </td><td> + + </td><td> + + + </td><td> NA </td></tr><tr><td> 기타 roundworms 5 </td><td> - </td><td> + </td><td> + + + </td><td> + + + </td><td> NA </td></tr></tbody></table> 1.이 방법은 동물의 안락사가 필요합니다. 2. 모든 protozoan 현재 사용할 수 PCR 검출 방법이 없습니다. 3.이 방법은 Syphacia 종을 감지에 가장 적합합니다. 4.이 방법은 Aspiculuris을 감지 가능성이 더 높습 수 있으며, Syphacia를 탐지 가능성이 적습니다. 5. 촌충과 pinworms 이외 roundworms 현대 실험실 마우스 및 쥐에서 매우 드문 있습니다. endoparasite 적절한 검색 방법 표 1. 클래스. 어떤 방법은 동물의 안락사가 필요합니다. NA는 방법이 현재이 기생충에 사용할 수 없습니다 표시 + 문제의 기생충 검출하는 방법의 적합성을 나타냅니다하고, -. 메서드가 해당 기생충 권장되지 않았음을 나타냅니다. <table border="1"><tbody><tr><td> 용액 </td><td> 비중 </td><td> 1L H 2 O 당 성분 </td></tr><tr><td> 나트륨 염화물 </td><td> 1.20 </td><td> 311g의 나트륨 염화물 </td></tr><tr><td> 나트륨 질산 </td><td> 1.20 </td><td> 338g 나트륨 질산 </td></tr><tr><td> 나트륨 질산 </td><td> 1.30 </td><td> 616g 나트륨 질산 </td></tr><tr><td> 설탕 </td><td> 1.20 </td><td> 1,170그램의 자당 1 </td></tr><tr><td> 쉐더의 설탕 </td><td> 1.27-1.30 </td><td> 1천5백63그램의 자당 1 </td></tr><tr><td> 황산 아연 </td><td> 1.18 </td><td> 493g의 황산 아연 </td></tr></tbody></table> 1. 이러한 솔루션은 냉장이나 방부제로 페놀 9 ML의 추가를 필요로합니다. 표 2. 방패 부양 솔루션 (스미스 외에서.) <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 털이 뽑다 (테이프 테스트) </td><td> 스킨 다쳤어요 1 </td><td> 직접 시험 1 </td><td> PCR </td></tr><tr><td> 이가 </td><td> - </td><td> - </td><td> + + </td><td> NA </td></tr><tr><td> 진드기 </td><td> + </td><td> + </td><td> + + + </td><td> + + + / NA 3 </td></tr><tr><td> 벼룩 사 </td><td> - </td><td> - </td><td> + </td><td> NA </td></tr><tr><td> 진드기 4 </td><td> - </td><td> - </td><td> + + </td><td> NA </td></tr></tbody></table> 그것이 살아있는 동물에서 수행하는 경우 1.이 방법은 마취가 필요합니다. 2.이 방법은 동물의 안락사가 필요합니다. 3. 진드기의 모든 종족에 대한 현재 PCR 검출 방법이 없습니다. 4. 벼룩과 진드기 현대 실험 동물 시설 극히 드문 있습니다. ectoparasite 적절한 검색 방법 표 3. 클래스. 어떤 방법은 동물의 안락사가 필요하며, 다른 방법은 마취가 살아있는 동물에서 그들을 수행할 수 있어야합니다. NA는 방법이 현재이 기생충에 사용할 수 없습니다 나타냅니다. NA는 방법이 현재이 기생충에 사용할 수 없습니다 표시 + 문제의 기생충 검출하는 방법의 적합성을 나타냅니다하고, -. 메서드가 해당 기생충 권장되지 않았음을 나타냅니다.

<ol><li>Baker, D. G. Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+DG+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Diseases Vol. 2, Academic Press. (2007).</li>
<li>Baker, D. G. Chapter 11. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+DG+%22Flynn%27s+Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Flynn's Parasites of Laboratory Animals</a>. Baker, D. G. , Blackwell. 303-398 (2007).</li>
<li>Owen, D. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOwen%2C+DG+%22Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Parasites of Laboratory Animals</a>. 12, Royal Society of Medicine. (1992).</li>
<li>Pritchett, K. R. Chapter 22. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPritchett%2C+KR+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Diseases Vol. 2, Academic Press. (2007).</li>
<li>Smith, P. H., Wiles, S. E., Malone, J. B., Monahan, C. M. Chapter 1. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSmith%2C+PH+%22Flynn%27s+Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Flynn's Parasites of Laboratory Animals</a>. Baker, D. G. , Blackwell. 1-13 (2007).</li>
<li>Wasson, K. Chapter 21. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWasson%2C+K+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Vol. 2, Academic Press. 517-550 (2007).</li>
</ol>

저자는 찰스 리버, 위에서 설명한 검사를 포함한 진단 테스트와 시약의 공급 업체의 모든 직원들이 있습니다.

연구실에 근무하는 경우, 안전은 항상 염려해야합니다. 동물과 작업할 때 적합한 보호 장비를 착용하고 전후에 살균제와 워크 스테이션을 청소하는 것을 잊지 말아주세요. 이 방법은 주로 위치에 실험실 설치류 동물의 기생충을 찾을 수 있도록 설계하는 것은, 검사 즉, 그들은 매우 드문 기생충뿐만 아니라보다 일반적인 pinworms 및 모피 진드기를 검색하거나 이국 수 있습니다. 그들이 다른 수종에 동일하게 적용되지만, 야생 설치류는 상기 방법에 의해 평가되지, 그러한 간, subcutis 및 뇌 같은 위치에 추가 기생충이있을 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 보드를 절단 </td><td> 써모 일렉트론 코프 </td><td> 고양이 # 36114 </td><td></td></tr><tr><td> 작은 가위 </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 5910, G204 </td><td> 23mm 블레이드, 3.5 &quot;길이, 스트레이트 </td></tr><tr><td> 중간 가위 </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 6808, G207 </td><td> 5 &quot; </td></tr><tr><td> 집게 - 곡선 </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 8254 (M1/21004) </td><td> 4.5 &quot;, 톱니 모양, 약간의 곡선 </td></tr><tr><td> 집게 - Microdissecting </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 5238 </td><td> 허드슨 - (에발트) </td></tr><tr><td> 집게 - 조직 집게 </td><td> ROBOZ </td><td> RS - 8160 </td><td> 랫 치아 </td></tr><tr><td> 금속 프로브 </td><td> VWR </td><td> 고양이 # 25778-000 </td><td></td></tr><tr><td> Hemostats </td><td> 우세 </td><td> V97 - 48 </td><td></td></tr><tr><td> 작은 주걱 스틱 </td><td> 청교도 </td><td> 6in Applicators, 심판 # 807 </td><td></td></tr><tr><td> 해부 현미경 </td><td> 올림푸스 </td><td> SZ51, 쇼트, ACE1 </td><td></td></tr><tr><td> 페트리 접시 </td><td> VWR </td><td> 100mm, 캣 # 3401PDNL </td><td></td></tr><tr><td> 커버 풀렸는데 </td><td> VWR </td><td> 마이크로 커버 유리, 고양이 # 48366-067 </td><td></td></tr><tr><td> 슬라이드 </td><td> VWR </td><td> VistaVision 현미경 슬라이드 고양이 # 16004-368 </td><td></td></tr><tr><td> 루프 Inoculating </td><td> VWR </td><td> 고양이 # 50815-040 </td><td></td></tr><tr><td> 라이트 현미경 </td><td> 올림푸스 </td><td> 모델 # BX41TF </td><td></td></tr><tr><td> 실험실 오븐 </td><td> 퀸시 랩 주식 회사 </td><td> 모델 10 랩 오븐 </td><td></td></tr><tr><td> 원심 분리기 </td><td> 베크맨 쿨터 </td><td> 알레 그라 X - 12R </td><td></td></tr><tr><td> Vortexer </td><td> VWR </td><td> 미니 Vortexer </td><td></td></tr><tr><td> 테스트 튜브 </td><td> 킴블 - 체이스 </td><td> 15 ML 일회용 원심 분리기 튜브, 고양이 # 73790-15 </td><td></td></tr><tr><td> 커버 풀렸는데 </td><td> VWR </td><td> 플라스틱 현미경 커버 풀렸는데, 22mm, 캣 # 48376-049 </td><td></td></tr><tr><td> 화이트 모자 </td><td> VWR </td><td> 고양이 # 60869-089 </td><td></td></tr><tr><td> 요오드 </td><td> 롤리 생화학 연구소 </td><td> 고양이 # SO - 364 </td><td></td></tr><tr><td> 황산 아연 </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> 고양이 # 1000917519, Z4750 - 500G </td><td></td></tr><tr><td> 자당 </td><td> Mallinckrodt 화학 </td><td> 고양이 # 8360-06 </td><td></td></tr><tr><td> 페놀 </td><td> EMD </td><td> 고양이 # PX0510 - 1 </td><td></td></tr><tr><td> 셀로판 테이프 </td><td> 스테이 플스 </td><td> 오프라인 테이프, 고양이 # 504712 </td><td></td></tr><tr><td> 미네랄 오일 </td><td> Mallickrodt </td><td> 고양이 # 6358 </td><td></td></tr></tbody></table>

연구실 고양이와 마우스에 외부의 뜻과 endoparasites의 진단

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

내부 및 외부 기생충 실험실 설치류 시설에 큰 관심 유지, 많은 연구 시설 일부 parasitized 동물을 품다. 기생충에 대한 동물 시험에 착수하기 전에, 두 가지가 고려되어야합니다. 하나 : 무엇을 사용이 수집한 정보의 만들어진 두 개의 것이다 : 어느 시험이 가장 적합합니다. 동물 parasitized 것을 아는 것은 시설 받아 무언가 수 있지만 동물 치료 후 치료의 효능을 결정하기 위해 필요가 종종 있습니다 있습니다. 기생충이 사는 euthanized 동물에서 가져온 샘플 등 다양한 기법을 통해 동물에서 검색된 수 있습니다. PCR은 기생충의 여러 유형에 대해 높은 감도 테스트를 사용할 수 있지만 역사적으로 가장 진단 감도 시험은 동물의 안락사를 필요합니다. 이 문서의 감지 엔도와 마우스 및 쥐의 ectoparasites 절차를 보여줍니다. 발견된 기생충의 종류가 다를 수 있지만 동일한 절차는 다른 설치류에 적용됩니다.

이 문서는 엔도 또는 ectoparasitism을 감지 선별 쥐 및 생쥐를위한 각종 절차에 대해 설명합니다. 여러 진단 assays이 시연되고, 살아있는 동물에서 사용하기에 적합 사람과 동물의 안락사 후 사용되는 모두. 쥐, 마우스 기생충의 식별에 도움을 사진이 포함됩니다.

연구실 고양이와 마우스에 외부의 뜻과 Endoparasites의 진단

실험용 설치류 시설에서 내부 및 외부 기생충은 여전히 중요한 관심사로 남아 있으며, 많은 연구 시설에 일부 기생충에 감염된 개체들이 서식하고 있습니다...

이 절차의 전반적인 목적은 실험용 쥐나 마우스에 기생충이 존재하는지 여부를 판단하는 것입니다. 이는 털 검사, 피부 검사, 분변 검사 및 장 내용물 검사를 포함한 다양한 방법으로 수행될 수 있습니다. 궁극적으로, 이러한 시료의 정기적인 검사를 통해 콜로니의 전반적인 건강 상태에 대한 중요한 정보를 제공하는 결과를 얻을 수 있습니다.이러한 방법들을 철저하고 세심하게 수행하지 않을 경우 기생충 감염을 놓칠 수 있으므로, 시각적인 시연이 매우 중요합니다. 일반적으로 이 방법들에 익숙하지 않은 사람들은 기술적으로 올바르게 수행하더라도 기생충을 잘못 식별할 가능성이 있어 어려움을 겪을 수 있습니다.우리가 시연할 방법들은 털 및 항문 주위 샘플을 채취하기 전, 연구에 사용되는 쥐와 생쥐의 건강 상태에 관한 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 동물당 최소 2개의 유리 슬라이드를 준비하고 미네랄 오일을 몇 방울 떨어뜨립니다. 대상 생쥐를 케이지에서 들어 올려 뒤집힌 케이지 뚜껑 안쪽에 놓습니다.꼬리를 잡습니다. 마우스의 회음부와 항문 주위에 5cm 길이의 셀로판 테이프를 단단히 부착합니다. 성공적으로 수행되었다면 테이프에 털이 붙어 있어야 합니다.동물을 계속 보정한 상태에서 핀셋으로 털을 잡습니다. 견갑 부위, 경부 복측, 겨드랑이 부위, 서혜 부위 및 등쪽 엉덩이 부위에서 털 샘플을 부드럽게 뽑아냅니다. 채취한 샘플을 5cm 길이의 셀로판 테이프 위에 부착합니다.각 샘플을 채취할 때마다 접착면이 아래로 향하게 하여 슬라이드에 테이프를 부착하십시오. 모든 샘플을 채취한 후, 각 샘플 위에 미네랄 오일을 한 방울 더 떨어뜨리고 유리 커버 슬립을 덮습니다. 항문 주변 슬라이드를 검사할 때, si facia 이외의 기생충 알이 발견될 가능성은 낮습니다.분변 검사를 위해, 각 동물 또는 케이지에서 분변 펠릿을 2~5개 수집합니다. 시료가 매우 건조한 경우, 0.9% saline 500 µL로 적십니다. 수집한 시료를 10 mL 약병 또는 분변 부유 장치에 넣습니다.수집 바이알을 페트리 접시에 놓고 바이알의 4분의 1 정도를 고밀도 부유액으로 채웁니다. 그런 다음 분변을 으깨고 바이알 내의 용액에 섞어 큰 덩어리가 남지 않도록 합니다. 바이알 가장자리 위에 메니스커스가 형성될 때까지 부유액을 계속 추가합니다.그 후 커버 슬립을 메니스커스 위에 올리고 바이알을 상온에서 15분 동안 배양합니다. 배양하는 동안 기생충, 충란, 프로테아솜 및 오아시스가 떠올라 커버 슬립에 부착되며, 이후 추가 검사를 위해 이를 슬라이드에 고정합니다. 이 분석법은 알약 보관용 바이알과 같이 단순한 용기에서도 수행할 수 있습니다.냉동고를 사용할 수 없는 경우, 동물당 2~10개의 분변 펠릿을 수집하는 것으로 시작하며, 건조된 상태라면 500 µL의 0.9% saline으로 재수화합니다. 15 mL 유리 원심분리관의 4분의 1을 고밀도 부유액으로 채우고 샘플과 혼합합니다. 유리관을 플라스틱 스냅 캡으로 덮고, 혼합물이 균질하게 보일 때까지 15~30초 동안 볼텍싱합니다.이제 각 시료 튜브에 부유액을 추가로 넣으십시오. 약간의 볼록한 메니스커스가 형성되어야 합니다. 각 튜브에 플라스틱 커버슬립을 덮고, 튜브 립과 완전히 밀착되었는지 확인하십시오.최적의 밀봉을 위해 면봉으로 튜브를 닦아냅니다. 그 다음 튜브와 커버슬립을 10분 동안 원심분리합니다. 커버슬립이 분실되었거나 파손된 경우, 이를 교체하고 튜브를 살짝 기울여 액체 표면(meniscus)이 새 커버슬립에 닿게 합니다.그런 다음 모든 커버슬립을 제거하여 라벨이 부착된 깨끗한 유리 현미경 슬라이드 위에 놓습니다. 요오드 염색은 마취되었거나 안락사된 동물의 낭포 식별에 도움이 됩니다. 꼬리 기부 근처의 등 쪽 털과 머리의 관자놀이 부위, 또는 피부 병변이나 긁어낼 다른 부위 주변의 털을 다듬고, 털 성장 방향의 반대 방향으로 스캘펠 날을 이용해 피부를 깊게 긁어냅니다.이렇게 하면 표피가 제거됩니다. 라벨이 부착된 슬라이드에 도포된 미네랄 오일로 날을 닦아내십시오. 필요한 경우 오일을 한 방울 더 추가하십시오.샘플을 유리 커버슬립으로 덮기 전, 안락사시킨 동물을 깨끗한 해부판 위에 놓고 핀셋을 사용하여 생식기 부위의 복벽을 들어 올립니다. 그런 다음 가위를 사용하여 생식기 부위부터 흉곽 기저부까지 복측 복벽을 조심스럽게 절개하고, 피부와 근육을 제거하여 장을 노출시킵니다. 이어서 맹장과 십이지장의 일부를 채취하여 페트리 접시의 뚜껑에 담습니다.각 장 분절을 세로 방향으로 절개합니다. 점막을 노출시키기 위해 라벨이 부착된 슬라이드 한 장 위에 0.9% saline 두 방울을 떨어뜨립니다. 그다지 멸균된 백금이를 사용하여 십이지장의 점막을 긁어낸 후, 긁어낸 조직을 saline 한 방울에 넣습니다.맹장에서 다른 방울로 시료를 옮기며 이 과정을 반복합니다. 남은 소화관을 제거합니다. 십이지장에서 시작하여 하행 결장까지 계속 진행합니다.장 조직을 100 mL 페트리 접시 바닥으로 옮깁니다. 가위로 장을 더 작은 구역으로 자릅니다. 수집된 조직이 겨우 잠길 정도로 페트리 접시에 수돗물을 충분히 넣습니다.시료 혼합물을 35~40 °C에서 최소 10분 동안 배양합니다. 이렇게 하면 마쇄된 장 시료가 배양되는 동안 루멘 헬멧(luminal helmets)이 유리되어 노출됩니다. 위상차 현미경을 사용하여 십이지장 및 SQL 시료 내의 기생충을 검사하십시오.전체 장 샘플의 배양이 완료되면, 해부 현미경으로 플레이트의 내용물을 관찰합니다. 탐침을 사용하여 세밀하게 검사합니다. 요충은 작은 흰색 머리카락 모양의 벌레 형태로 나타납니다.조충은 마디가 있는 납작한 벌레 형태로 나타납니다. 작은 핀셋을 사용하여 벌레나 의심스러운 물질을 수집해 슬라이드 글라스에 고정합니다. 광학 현미경으로 추가 검사를 하려면, 안락사시킨 마우스나 랫트를 해부 현미경의 10 x 대물렌즈 아래 스테이지 위에 직접 놓고, 어플리케이터 스틱으로 털을 헤쳐 모근 부분을 관찰합니다.외부 기생충은 비듬처럼 보이거나 모간 하단 또는 피부 위에 노란색의 왁스 같은 침착물 형태로 나타날 수 있습니다. 최소한 두개 부위, 서혜부 및 액와 부위에서 외부 기생충을 탐색하십시오.작은 핀셋을 사용하여 눈 사이, 동전 사이, 견갑골 사이 및 턱 아래를 주의 깊게 확인하십시오. 발견된 외부 기생충 및 기타 의심 물질을 슬라이드로 옮기십시오.동정을 위해 미네랄 오일에 마운팅합니다. 이러한 절차를 통해 많은 일반적인 기생충을 발견할 수 있습니다. 다음은 몇 가지 예시입니다.이들은 회음부 테이프 검체에서 발견된 SE 얼굴 진드기 알입니다. 분변 원심분리 표본에서 쥐털진드기(myopia musculi)가 포함된 털 뭉치가 발견되었습니다. 이들은 털진드기(picis tetter) 알입니다.장 점막의 직접 검사에서 trioni가 관찰될 수 있으며, 짓이긴 장을 검사한 결과 성체 요충들이 확인되었습니다. 숙달되면 기생충에 대한 이 전체 검사는 1시간 이내에 완료할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 쥐와 생쥐의 기생충에 대한 다양한 검사 수행 방법을 충분히 이해하게 될 것입니다. 이러한 기생충 중 일부는 사람에게 전염될 수 있다는 점을 잊지 마십시오.항상 기본적인 실험실 안전 수칙을 준수하십시오.

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Research

연구

JoVE Journal

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