Legatura del cieco procedura di puntura

Ciao, mi chiamo Miguel Toscano del laboratorio della dottoressa Dena del dipartimento di Microbiologia ed Ematologia della Temple University. Oggi vi mostreremo come impostare il modello di infezione e puntura iCal nel ceppo murino C 57 Black Seas. Utilizziamo questo modello nel nostro laboratorio per simulare la sepsi umana.

Fondamentalmente, questo modello consiste in una puntura del cieco che permette il rilascio di materiale fecale nella cavità peritoneale, inducendo una sepsi polimicrobica e generando così una risposta immunitaria esacerbata. In questo modello, molti organi e diversi tipi cellulari vengono danneggiati in modo irreversibile, evento che alla fine può causare la morte dell'animale.

Iniziamo. Anestetizzare il topo. Il primo passo consiste nell'anestetizzare l'animale mediante iniezione intraperitoneale.

Una miscela, uno a uno, di Ketomine e xilazina. Per evitare di essere morsi dal topo e per evitare di fargli male, dobbiamo afferrare il topo dalla coda con una mano. Con l'altra mano, premiamo indietro contro il pavimento.

Quindi possiamo afferrare il topo dalla parte posteriore della testa e girare l'animale sulla schiena per esporne l'addome. Con una siringa per insulina da 29 gauge, iniettiamo da 20 a 30 microlitri di anestetico nella cavità peritoneale. Per preparare il topo all'intervento, afferrare la parte posteriore del topo e rasare l'addome premendo la coda e/o la zampa del topo.

Verifichiamo che il topo non sia sensibile al dolore, quindi l'addome viene disinfettato. Innanzitutto strofinando con soluzione di Betadine, seguito da una pulizia con salvietta di alcol isopropilico per almeno un minuto. Per esercitarsi nella laparotomia, solleviamo la pelle al centro dell'addome con la pinzetta ed effettuiamo una piccola incisione di circa un centimetro di lunghezza.

Sollevare quindi il perineo ed eseguire un'altra piccola incisione per esporre la cavità peritoneale. Utilizzando pinze curve, afferrare la membrana peritoneale. Identificare ed esporre il cieco facendolo passare attraverso la membrana peritoneale.

Posizionarlo sull'addome. Ora è il momento della legatura. Questo è un fattore importante.

Per determinare la gravità del modello, è possibile modulare la severità della procedura. Estendendo la legatura, i topi svilupperanno una sepsi più lieve. Se la legatura viene effettuata più vicino all'estremità del cieco, si avrà una sepsi di grado medio se eseguita al centro, e una sepsi grave se effettuata più vicino alla valvola ileocecale; la gravità della procedura sarà riflessa dalla percentuale di mortalità.

Non legare mai la valvola ileocecale. Effettuare ora la legatura utilizzando un filo di seta con un nodo doppio per renderla ben stretta; tenere fermo il cieco ed effettuare con attenzione una puntura vicino al sito di legatura, quindi praticare un’altra puntura più vicina all’estremità del cieco. La membrana del cieco è tenera e verrà perforata molto facilmente.

Utilizzando aghi di diversi spessori ed effettuando una o due perforazioni, possiamo anche modulare la gravità del modello. Il metodo di perforazione singola o doppia qui mostrato rappresenta una tecnica alternativa rispetto alla classica perforazione attraverso e attraverso. Il vantaggio dell'utilizzo del metodo di perforazione singola o doppia è che consente un migliore controllo della quantità di feci espulse quando si comprime l'ileo.

Tenere il ceco con due dita ed estrarre delicatamente una quantità minima di feci. Chiudere quindi la laparotomia, sollevare il peritoneo e riposizionare con attenzione il ceco all'interno della cavità peritoneale.

Siate estremamente cauti per evitare punture accidentali del cieco con la pinza; si raccomanda l'uso di pinze più grandi. Ora è il momento di chiudere la cavità peritoneale. Utilizzando un filo di seta, è molto importante assicurarsi che la chiusura sia ben eseguita.

Si parte da un lato della ferita dove si esegue un nodo. Continuare a effettuare la sutura fino all'altro lato, passando la seta sotto il cappio del foro precedente. Per chiudere la cute, si possono utilizzare clip per ferite di Mitchell o clip reflex, impiegando lo strumento appropriato per chiudere le clip.

Posizionare quanti clip necessari per assicurarsi che la ferita sia chiusa. Rianimare i topi iniettando sottocute un millilitro di soluzione salina preriscaldata. Utilizzando un ago da 25 gauge, questa misura di rianimazione fluida indurrà la fase iperdinamica della sepsi, completando la procedura.

Posizionare il topo sotto una lampada a infrarossi oppure su un tappetino riscaldante finché non si riprende dall'anestesia. Fornire cibo e acqua sul fondo della gabbia e controllare gli animali ogni otto-dodici ore per osservare segni di malattia. Iniettare buprenorfina per via sottocutanea per l'analgesia postoperatoria.

Un diverso analgesico da utilizzare è il Tramadolo. I segni di sepsi, i sintomi di sepsi sono febbre, letargia, pelo irto, erezione, diarrea, raggruppamento e malessere. Gli animali molto malati mostrano una grave diminuzione della temperatura corporea e si muovono a malapena per evitare sofferenze.

Devono essere sottoposti a eutanasia in questa fase H. Quindi, questo è il modo in cui eseguiamo il modello di legatura a cispa e puntura. Speriamo che abbiate apprezzato la dimostrazione di questa procedura e che l’abbiate trovata molto utile per la vostra ricerca prima di iniziare lo studio sugli animali. Raccomandiamo vivamente di utilizzare cervelli vecchi o non utilizzati per l’addestramento, al fine di stabilire il grado di gravità appropriato per i vostri esperimenti modificando la lunghezza della legatura, lo spessore dell’ago e il numero di punture.

Detto ciò, arrivederci.