Legatura del cieco procedura di puntura

Ciao, mi chiamo Miguel Toscano del laboratorio del Dr.Tena nel dipartimento di Microbiologia ed Emologia della Temple University. Oggi ti mostreremo come impostare il modello di accusa e puntura iCal nel ceppo C 57 Black Seas Mouse. Utilizziamo questo modello nel nostro laboratorio per imitare la sepsi umana.

Fondamentalmente, questo modello consiste in una puntura del seum che permette il rilascio di materiale fecale nella cavità peritoneale per produrre una sepsi polimicrobica, generando così una risposta immunitaria esacerbata. In questo modello, molti organi e diversi tipi di cellule sono danneggiati in modo irreversibile. Questo alla fine può causare la morte dell'animale.

Quindi iniziamo. Anestetizzare il topo. Il primo passo è l'anestetizzazione dell'animale mediante iniezione intraperitoneale.

Una miscela, uno a uno, di chetomina e xilazina. Per evitare di essere morsi dal topo, per evitare di fargli male, dobbiamo afferrare il topo dalla coda con una mano. Con l'altra mano, premiamo contro il pavimento.

Quindi possiamo afferrare il topo dalla parte posteriore della testa e poi girare l'animale sulla schiena per esporre l'addome. Con una siringa da insulina di calibro 29, iniettiamo da 20 a 30 microlitri di anestesia nella cavità peritoneale. Preparazione del mouse per la procedura, afferrare la parte posteriore del mouse e radersi l'addome premendo la coda e/o la gamba del topo.

Controlliamo che il topo non sia sensibile al dolore, quindi l'addome viene disinfettato. Prima strofinando con la soluzione di Betadine, quindi strofinando con una salvietta imbevuta di alcol isopropilico per almeno un minuto. Praticare la laparotomia Per praticare una laparotomia, solleviamo la pelle al centro dell'addome con il forcipe e facciamo una piccola incisione di circa un centimetro di lunghezza.

Quindi sollevare il perineo e praticare un'altra piccola incisione per esporre la cavità peritoneale. Usando una pinza curva, tenere la membrana peritoneale. Identificare ed esporre il cieco facendolo passare attraverso la membrana peritoneale.

Posizionalo sull'addome. Ora è il momento della legatura. Questo è un fattore importante.

Per determinare la gravità del modello, possiamo modulare la gravità della procedura. Con l'estensione della legatura, i topi svilupperanno una sepsi più lieve. Se la legatura viene effettuata più vicino alla fine del cieco, una sepsi di grado medio se eseguita nel mezzo e una sepsi grave se eseguita più vicino alla valvola ileocecale, la gravità della procedura si rifletterà nella percentuale di mortalità.

Non legare mai la valvola ileocecale. Ora fai la legatura usando la sutura di seta con un doppio nodo per renderla stretta, facendo la puntura Tenere il cieco e fare con cura una puntura vicino al sito di legatura e fare un'altra puntura più vicino alla fine del cieco. La membrana del secum è morbida e si fora molto facilmente.

Utilizzando aghi con spessori diversi e realizzando una o due perforazioni, possiamo anche modulare la gravità del modello. Il metodo di puntura singola o doppia qui mostrato è una tecnica alternativa alla classica puntura a seguito e a posteriori. Il vantaggio di utilizzare il metodo di puntura singola o doppia è che si può controllare meglio la quantità di feci estruse quando le cercano di spremere.

Tenere il secum con entrambe le dita ed estrudere delicatamente il cieco per estrarre una piccolissima quantità di feci. Chiusura della laparotomia, quindi sollevare il peritoneo e riposizionare con cura il cieco. Nella cavità peritoneale.

Prestare la massima attenzione per evitare punture accidentali del cieco Con il forcipe, si consiglia l'uso di pinze più grandi. Ora è il momento di chiudere la cavità peritoneale. Usando la sutura di seta, è molto importante assicurarsi che sia ben chiusa.

Partiamo da un lato della ferita dove facciamo un nodo. Continua a fare la sutura fino all'altro lato passando la seta sotto l'anello della puntura precedente. Per chiudere la pelle, possiamo utilizzare le clip per ferite Mitchell o le clip per riflessi utilizzando lo strumento giusto per chiudere le clip.

Posiziona tutte le clip necessarie per assicurarti che la ferita sia chiusa. Rianimare i topi iniettando per via sottocutanea un millilitro di soluzione salina preriscaldata. Utilizzando un ago calibro 25, questa misura di rianimazione con fluidi indurrà la fase iperdinamica della sepsi, terminando la procedura.

Posizionare il mouse sotto una luce riscaldante a infrarossi o, in alternativa, su un termoforo fino a quando il mouse non si riprende dall'anestesia. Fornire cibo e acqua sul pavimento della gabbia e sorvegliare gli animali ogni 8-12 ore per rilevare eventuali segni di malattia. Iniettare buprenorfina per via sottocutanea per l'analgesia postoperatoria.

Un analgesico diverso da usare è il T.Tramadolo. I segni della sepsi, i sintomi della sepsi sono febbre, letargia, pelo, erezione, diarrea, rannicchiamento e malessere. Gli animali molto malati mostrano una grave diminuzione della temperatura corporea e si muovono a malapena per evitare di soffrire.

Dovrebbero essere soppressi in questa fase H.So è così che eseguiamo la legatura a falce e il modello puntuale. Si spera che ti sia piaciuta la dimostrazione di questa procedura e l'abbia trovata molto utile per la tua ricerca prima di iniziare lo studio sugli animali. Ti consigliamo vivamente di utilizzare menti vecchie o inutilizzate per l'allenamento al fine di stabilire il grado di gravità appropriato per i tuoi esperimenti modificando la lunghezza della legatura, lo spessore dell'ago e il numero di punture.

Detto questo, arrivederci.