Necroscopia diagnostica e selezionati Collezione di tessuti e campioni di ratti e topi

L'obiettivo generale di questa procedura è eseguire una necroscopia di base per roditori. Ciò si ottiene registrando prima le informazioni di base sull'animale. Il secondo passo della procedura consiste nell'esaminare i visceri.

Il terzo passo consiste nel raccogliere campioni come organi o linfonodi mesenterici. In definitiva, lo stato di salute di un animale può essere determinato attraverso l'istopatologia o altre tecniche. In generale, le persone che non conoscono l'esecuzione di un'autopsia avranno difficoltà perché le anatomie dei roditori apprese sul lavoro.

Questi metodi possono aiutare a rispondere a domande chiave sulla salute degli animali in una colonia di ricerca. La dimostrazione visiva di queste tecniche è essenziale in quanto richiede tempo per apprendere le posizioni dei vari tessuti e come identificare il tessuto normale da quello anormale. Prima di sopprimere l'animale, raccogli informazioni sulla sua storia e registra le sue caratteristiche attuali come la condizione fisica, il comportamento, il sesso, l'età, il peso, lo sforzo e così via.

Questo record è un'età vitale per la persona che esaminerà i tessuti prima dell'eutanasia dell'animale. Assicurarsi che vengano utilizzati dispositivi di protezione individuale adeguati. Preparare una dissezione, una pinza per il pannello, le forbici, le etichette per i contenitori, il fissativo, i terreni e i recipienti di raccolta.

Dopo l'eutanasia dell'animale, valutare le sue condizioni corporee, verificare la presenza di anomalie della pelle e del pelo, deperimento e disidratazione. Cerca anche prove di manipolazioni artificiali, impianti o cicatrici chirurgiche sull'animale. Successivamente, utilizzando un microscopio da dissezione, esaminare in dettaglio tutti gli orifizi esterni.

Questi includono le orecchie, gli occhi, il naso, la bocca, l'ano e i genitali. Ora, adagiate l'animale sulla schiena sulla tavola di dissezione, sollevate la sua pelle con una pinza e usate le forbici per tagliare la pelle dall'ano al mento. Quindi, rifletti la pelle ai lati e taglia la parete addominale e la gabbia toracica.

Esporre i visceri toracici praticando due tagli lateralmente su ciascun lato della gabbia toracica. Tagliare il diaframma. Quindi rimuovere la gabbia toracica tagliando la parte superiore dello sterno.

Ora, esamina gli organi toracici e addominali esposti. Conosci eventuali cambiamenti di colore, odori insoliti, dimensioni, differenze e organi mancanti o dislocati. Esaminare la consistenza delle superfici degli organi e annotare eventuali masse di tessuto o tasche piene di liquido.

Inoltre, notare la presenza di liquido in entrambe le cavità. Continuare l'esame con il tratto gastrointestinale. Esamina il mesentere per verificare la presenza di linfonodi ingrossati o masse di tessuto.

Descrivi il contenuto del tratto gastrointestinale e controlla attentamente la presenza di pareti ispessite, masse o emorragie. Per esaminare l'interno dei reni, utilizzare una lama per creare una sezione longitudinale del rene sinistro e una sezione trasversale del rene destro fuori dal centro della linea mediana. Controllare il parenchima per eventuali anomalie.

Ora ispeziona il sistema urogenitale nei maschi. Identificare le vescicole seminali, i testicoli, l'epididimo, gli ureteri e le ghiandole perusali nelle femmine. Identificare l'utero, le ovaie e gli ureteri.

Esaminare il sistema urogenitale per verificare la presenza di ostruzioni, sacche di liquidi, emorragie o altre anomalie. Dopo aver completato questi esami, isolare e asportare gli organi bersaglio per ulteriori esami. In genere, il cuore, il fegato, i reni e la milza vengono raccolti durante l'asportazione.

Immergi ogni organo in un fissativo o segui i primi passaggi di un protocollo che richiede questi tessuti, come il congelamento o l'immunoistochimica, per ottenere un'adeguata fissazione. Generalmente, i tessuti sono immersi in un conservante come il 10% di NBF in un rapporto di 20 volumi di fissativo per un volume di tessuto. Quando si lavora con i ratti, raccogliere l'aspirato bronchiale prima dell'aspirato nasale.

Inizia riflettendo la pelle nei tessuti sottocutanei lontano dalla zona cervicale, esponendo così le ghiandole salivari e la muscolatura cervicale. Quindi rimuovere quei tessuti per esporre la trachea. Praticare un'incisione di tre millimetri nella trachea e inserire una pipetta caricata con un millilitro di liquido di campionamento nel lume tracheale diretto trimestralmente.

Lavare lentamente il liquido di campionamento attraverso la trachea e nei polmoni tre volte. Quindi prelevare il liquido di campionamento e rimuovere la pipetta dalla trachea. Non tutto il fluido ritornerà nella pipetta.

Pertanto, ripetere il processo se è necessario più fluido. Per i test nei topi. Per prelevare un campione di aspirato nasale o bronchiale, accedere all'ATU faringeo nasale utilizzando forbici sterilizzate.

Recidere l'articolazione mandibolare temporale e riflettere la mandibola lontano dalla mascella, esponendo l'atu faringeo nasale per raccogliere l'aspirato nasale. Inserire una pipetta caricata con un millilitro di liquido di campionamento nell'atu faringeo nasale del topo o nel lume tracheale del ratto. La pipetta deve essere diretta e spinta.

Quindi la punta entra in contatto con il palato nasale. Una volta lì, iniettare lentamente il fluido di campionamento. Quando il fluido entra nella cavità nasale, formerà menischi all'orifizio nasale e dovrebbe essere visibile anche attraverso il palato orale traslucido.

Tuttavia, se il liquido esce dalla bocca, riorientare la pipetta. Una volta iniettato completamente, aspirare il liquido di campionamento dalla cavità nasale nella pipetta, quindi rimuovere la pipetta. Inizia afferrando la trachea con il forcipe e tagliala appena sopra il forcipe.

Quindi, tirare delicatamente la trachea verso l'alto, tagliando le connessioni tissutali fino a quando l'intero set di tessuti toracici può essere asportato. Ora, appoggia i polmoni sulla superficie di lavoro e lega liberamente un pezzo di sutura o una corda attorno alla trachea. Non stringere il nodo, altrimenti non sarai in grado di far passare l'ago nella trachea.

Ora, riempi una siringa con il fissativo e inserisci l'ago nell'apertura della trachea fissando la trachea all'ago. Con una pinza, riempi lentamente i polmoni con il fissativo fino a quando non sono completamente gonfiati. Il volume del fissativo varia a seconda dell'età, del ceppo e della salute dell'animale.

Se i tessuti sgonfi appariranno piatti, se troppo gonfiati, il liquido schiumoso filtrerà dal tessuto una volta riempito, stringere il materiale di sutura o la corda che circonda la trachea per prevenire il riflusso del fissativo dai polmoni. Quindi posizionare i polmoni gonfiati in fissativo. Posizionare la carcassa su una tavola di dissezione pulita in posizione ventrale sdraiata e utilizzare forbici e pinze per rimuovere la pelle e il muscolo sovrastante il polpaccio.

Quindi decapitare la carcassa usando piccole forbici. Inserire la lama inferiore nel forame magno e tagliare la linea mediana del polpaccio con un movimento verso l'alto. Ora, esponi il cervello con il forcipe aprendo il polpaccio.

Se il patologo preferisce tagliare sezioni del cervello mentre si trova nel cranio, posizionare immediatamente il cranio con il cervello esposto al 10% di NBF. Altrimenti, afferra la testa intorno al naso con una pinza o le dita e capovolgi delicatamente il cranio in modo che la gravità aiuti il tessuto a cadere dal cranio. Attentamente. Pinza a curva scorrevole lungo il bordo esterno del cervello a partire dai lobi olfattivi.

Continua a far scorrere la pinza lungo il cranio verso il cervelletto, mentre pizzica delicatamente i nervi con la stessa pinza. Quando il cervello rilascia il posto in fissativo, per localizzare prima i linfonodi mesenterici, localizzare il grande secum a forma di comm dell'intestino. I linfonodi mesenterici sono i grumi gialli ovoidali o sferici di tessuto nel mesentere adiacente al cieco.

Spesso sono leggermente più spessi e di consistenza più soda rispetto al mesentere e al grasso circostanti. Un endoscopio da dissezione può essere utile per differenziare i tessuti all'inizio, ma con l'esperienza non sarà necessario. Usando pinze e forbici, isolare i linfonodi mesenterici, quindi trasferirli in una provetta di conservazione per essere utilizzati per la coltura, la PCR o l'istopatologia.

Dopo aver completato il protocollo, quanto segue è disponibile per un patologo o uno scienziato, un rapporto scritto sulla condizione oggettiva e soggettiva all'eutanasia. Una descrizione oggettiva dei tessuti prima della loro fissazione, di tutti i principali organi addominali e toracici in fissativo, del cervello e dei linfonodi mesenterici e dei campioni di aspirato nasale e bronchiale. Una volta padroneggiata, una necroscopia abbreviata può richiedere meno di 30 minuti.

Durante l'esecuzione di questa procedura, è importante ricordare di registrare le osservazioni sulle condizioni dell'animale e dei suoi tessuti. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire un'autopsia completa dei roditori, inclusa la raccolta di polmoni perfusi, linfonodi mesenterici e cervello.